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目的：LacZDNA标记的腺病毒在高氧性肺损伤基因治疗中的转染和致炎作用。方法：装载LacZDNA的腺病毒在小鼠高氧模型开始前2天经鼻腔送入体内X-lal染色和β一半乳糖酶活性测定用于确定LacZDNA在肺内转染的分布及其蛋白表达产物的活性;小鼠肺干,湿重比和支气管肺泡盥洗液（BALF）内的蛋白浓度的测定用于鉴定腺病毒在基因治疗过程中可能存在的致炎作用。结果：X-gal染色显示LacZDNA在高氧前及后均可广泛转染在肺各级支气管和肺泡上皮细胞,β一半乳糖酶活性的测定提示了LacZDNA可成功地翻译成其蛋白质表达产物并表现为高表达;同时,腺病毒的致炎作用在高氧吸入48h后示小鼠肺干,湿重比和BALF蛋白浓度均较其他对照组明显升高,但其升高的程度可在24h后迅速缓解上升趋势。结论：腺病毒为载体的基因治疗可有效地转染标记基因,同时,腺病毒虽在基因治疗的过程中有一定的致炎作用,但是暂时的,其仍是有效的DNA载体。 相似文献
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目的:研究新型溶瘤腺病毒GP73-SphK1sR-Ad5对肝癌细胞生长的抑制作用。创新点:GP73-SphK 1sR-Ad5是一种新型的溶瘤腺病毒,可以特异及有效地抑制肝癌细胞生长,为肝癌的临床治疗提供新思路。方法:通过整合高尔基体蛋白73(GP73)及鞘氨基醇激酶1(SphK 1)构建了GP73-SphK1sR-Ad5腺病毒,进而转染肝癌Huh7细胞及正常HL7702肝细胞。通过实时定量PCR和蛋白印记实验检测Sph K1和E1A基因的表达;通过四氮唑盐比色分析法(MTT法)检测细胞活力;通过流式细胞术检测细胞凋亡率。构建Huh7异种移植小鼠模型,并注射GP73-SphK1sR-Ad5腺病毒。20天后,记录小鼠肿瘤体积和重量,以及存活时间。用苏木精-伊红(HE)染色法和透射电镜(TEM)观察肿瘤组织的病理变化。结果:GP73-SphK 1sR-Ad5转染显著上调了Huh7细胞中E1A的表达,下调了SphK 1的表达,降低了细胞活性,并提高了凋亡率,然而对HL7702细胞无明显影响。Huh7异种移植小鼠模型内注射GP73-SphK 1sR-Ad5显著降低了肿瘤的体积和重量,延长了小鼠的存活时间,并降低了肿瘤组织中的肿瘤浸润面积、血管密度及核变形和染色质浓缩的细胞数。结论:新型溶瘤腺病毒GP73-Sph K1s R-Ad5可以特异和有效地抑制肝癌进展。 相似文献
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设计小鼠Txt5基因的特异性引物,将小鼠c DNA作为模板,用PCR扩增出m Txt5编码区,并加入HA标签序列.将这一片段插入p MD-18T载体,再亚克隆至p Adtrack-cmv穿梭载体上.线性化后,转化BJ5183感受态细胞,在BJ5183中发生同源重组获得p Ad-Txt5质粒.p Ad-Txt5线性化后转染293A细胞,包装得到含Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过RT-PCR和免疫印迹法检测HA标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达. 相似文献
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胡俊赵熠杨国华赵旻武军驻 《实验室研究与探索》2022,(6):244-247
基础医学实验教学的重要目标之一是激发学生的科研兴趣和培养学生的科研素质。为了解决传统基础医学实验教学中知识体系割裂、连贯性不足的问题,以荧光蛋白报告系统和慢病毒表达系统为主要实验对象,建立了一个融合基因克隆、载体构建、细胞培养、慢病毒生产及慢病毒感染、裸鼠成瘤和肿瘤活体观察等实验内容的综合实验并获得了良好的实验效果。该综合科研实验充分融合了本科基础医学实验内容,有效地将实验教学与科研工作相结合,有助于提高学生的学习热情,增强学生的实验思维和培养医学生的科研能力。 相似文献
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《洛阳师范学院学报》2016,(3):10-15
思想实验的本体为理论实体。在当代科学前沿,理论实体已远离基于经验的物质实体。这是思想实验与物质实验的本质区别之一。理论实体是人的思维的产物,具有不确定性,作为一种科学意象而存在。在思想实验的运作过程中,人们"看"到了一组实验对象连续变化的"图像",其实质是科学意象的不断转换。思想实验本体的意象化存在方式,为思想实验条件的理想化的实现提供了可能。这也正是思想实验优越于物质实验之所在。 相似文献
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化学课外实验是通过活动时的情境体验来培养学生实践能力和创新意识、提高学生综合素质的一个有效载体.本文着重探讨了化学课外实验活动的组成特点及运作策略. 相似文献
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通过对概念转喻的本质、认知原则、认知运作模式及其认知理据等的解读,说明转喻作为一个认知域中的概念映射,是一个概念实体或载体,在同一ICM或认知域内运作,向另一个概念实体或目标提供心理可及的认知过程。其认知的基本原则是邻近性相对突显性和可及性原则。它可以在多种转喻生成关系的同一ICM中运作,其目标义在概念上是突显的。通过分析汉语熟语在概念整合网络中的在线意义构建和幕后认知,认为Fauconnier的心理空间理论和概念整合理论对于转喻性和隐喻性习语表达方式的工作机制和解释提供了一种适当的理据。 相似文献
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本实验目的是探索G IF接种在脑内进行中枢神经系统疾病基因治疗的可行性.方法是用适量的G IF-GFP融合蛋白腺病毒载体直接注入c57小鼠脑内,3天、7天、28天、60天后分别用显微镜观察脑切片,结果发现G IF-GFP融合蛋白在脑中有表达且安全稳定.实验结果表明利用G IF进行中枢神经系统疾病的基因治疗是可行的. 相似文献
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