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1.
林良斌 《湘潭师范学院学报(社会科学版)》1991,(3)
突变产生和修复的机制是遗传学中 个最其本的问题,许多学者正在为之而奋斗.如果这个问题弄清楚了,那将对诱变育种和人类遗传病的治疗起到理论上和实践上的指导作用.突变的修复和突变的产生是相互矛盾的.但SOS修复是一种特殊的修复,在修复过程中产生大量的突变.本文着重谈谈这个问题.1 SOS修复 1.1 SOS修复的发现 SOS修复现象是四十年代发现的,但对它的机制以及功能的研究在七十年代中期才兴起.Witkin是研究SOS修复最有贡献的人之一. 相似文献
2.
通过两种从大肠杆菌中提取重组质粒pRSETDNA不同方法的比较,寻找提取重组质粒pRSET DNA的切实可行的方法.将含有目的质粒的菌株分别采用SDS碱裂解法和煮沸法进行质粒DNA小量提取,采用DU800核酸蛋白分析仪测定质粒DNA的产量及纯度.结果SDS碱裂解法获得质粒DNA产量为5.61 μg/ml菌液,A260/280=1.95;煮沸法获得质粒DNA产量为4.36μg/ml菌液,A260/280=1.78.与煮沸法相比,SDS碱裂解法获得质粒产量更多,纯度更高,更适合分子生物学常规实验的要求. 相似文献
3.
采用紫外诱变方法对实验室保藏的粗酶活为10 U/mL的野生微球菌SX-1进行诱变处理以获得高产酶能力的菌株,实验得到最佳诱变条件为:15 W紫外灯,垂直照射距离为30 cm,处理时间为90 s,通过荧光圈初筛和摇瓶复筛,筛选出一株突变菌株,酶活可达到22.5 U/mL,比出发菌株脂肪酶活力提高了125%,将其连续传代5次,酶活稳定,是一株比较理想的脂肪酶产生菌. 相似文献
4.
本文研究了DEAE-Cellulose阴离子交换树脂纯化pCR-HBc-X6-βhCG CTP37质粒DNA的方法。经研究发现纯化的质粒不含RNA和蛋白质污染;其OD260/OD280高于1.8;每2500ml发酵液可得到4.95mg的质粒DNA。 相似文献
5.
克隆、构建弹状胭脂鱼弹状病毒糖蛋白基因重组质粒,并进行表达和鉴定.用RT-PCR方法扩增出大小为1.5kb的CSRV-G基因片断,构建重组克隆质粒pRSET-C/CSRV-G,并将其转化进入大肠杆菌DH5α原核表达系统,酶切鉴定证明重组质粒的正确性.经IPTG诱导后表达重组蛋白,利用SDS-PAGE对表达产物进行分析鉴定,诱导后能够表达预期的分子量为55 kD的融合蛋白. 相似文献
6.
本研究以被孢霉菌株（Mortierella alpina）为出发菌株,分别采用紫外线诱变、亚硝酸钠诱变及紫外线与亚硝酸钠的复合诱变方式对孢子悬浮液进行诱变处理.结果表明,在紫外线处理6min后,酶活性高达8.657U/mL,比出发菌株提高2.354倍;在亚硝酸钠处理8min后,酶活性为6.081U/mL,较之出发菌株提高1.658倍;在复合诱变的紫外照射6min和亚硝酸钠处理8min的情况下,酶活性高达9.141U/mL,比出发菌株提高了2.493倍. 相似文献
7.
以地皮菜为研究对象,对原植体进行不同方式的处理,利用BG11培养基进行培养,研究了H2O2、乙醇、紫外处理对藻种分离的影响,通过镜检观察,筛选出原植体的不同处理条件下的最佳处理方式,并且对地皮菜的不同发育阶段进行了观察.结果表明：对原植体进行不同的单因素处理和多因素的复合的处理,分离地皮菜藻种,筛选出的单因素条件分别是1％H2O2、H2O2处理时间是30s、75％乙醇、乙醇的处理时间40s、紫外照射20min、紫外强度是800uW/cm2,筛选出的复合处理条件是1％H2O2、H2O2处理时间30s、乙醇浓度75％、乙醇处理时间40s、紫外处理时间10min、紫外强度800 uW/cm2,同时在不同条件下地皮菜存在多种繁殖方式和多个形态发育阶段. 相似文献
8.
庄莹 《闽西职业技术学院学报》2008,10(1):120-122
建立了高效液相色谱法测定克雷伯杆菌发酵甘油产物1,3-丙二醇(1,3-propanediol 1,3-PD)含量方法;应用紫外诱变法筛选耐高浓度甘油的高产1,3-PD的变异菌株,较佳的诱变条件为菌体诱变浓度为10-5稀释度,紫外照射时间为6min,经6轮诱变,筛选出了耐90g/L甘油的变异茼株,1,3-PD产量较原始菌株的提高了30%左右. 相似文献
9.
用十二烷基硫酸钠消除枯草芽孢杆菌中的质粒 总被引：3，自引：0，他引：3
为获得宿主菌 ,研究了十二烷基硫酸钠 (SDS)对枯草芽孢杆菌中质粒的消除 .将过夜培养的枯草芽孢杆菌2 4/pMX45接种于含SDS( 0— 0 .0 0 8% )的LB培养基中 ,当SDS浓度 (w /v)大于或等于 0 .0 0 6 %时 ,菌体不能生长 .SDS的亚致死浓度为 0 .0 0 5 % ,其致死率达 99% .菌液稀释后涂LB平板 ,再随机挑选单菌落至抗性平板 ,检测由质粒编码的红霉素抗性是否丢失 .氯化铯 溴化乙锭梯度离心及质粒DNA的电泳图像证实了 2 4/pMX45的衍生菌株A7中的质粒已完全被消除 .A7延迟期较短 ,并且细胞浓度高于 2 4/pMX45 .用SDS处理 8h后 ,2 4/pMX45的遗传标记开始丢失 ,消除率持续增高至 2 2h ,随之消除质粒的菌体量保持恒定 .在未经SDS处理的对照实验中 ,相同条件下培养 2 4h及 48h后 ,没有发现质粒自然丢失的现象 ,因此SDS能消除枯草芽孢杆菌中的质粒 相似文献
10.
将pUC18-leg质粒上的野豌豆贮藏蛋白基因(leg)与pBR325的氯霉素抗性(Cm)基因连接在一起,构建出中间载体pJG9,通过三亲交配技术,将大肠杆菌中的pJG9转移至含pGV3850的农杆菌中,并选出含整合质粒的农杆菌.利用类似叶盘转化法的方法,将pGV3850上的外源基因转入甘蓝中,在含Cm15/μg/ml和先锋霉素500μg/ml的培养基上,选择愈伤组织并由此再生出转化植株,并得到胭脂碱测定和DNA分子杂交的证实. 相似文献
11.
通过PCR技术扩增出人铁蛋白基因,经酶切后与表达载体质粒pGEX-4T-2连接,重组质粒转化感受态大肠杆菌,利用菌落PCR、质粒双酶切、测序,证实成功地构建了人铁蛋白基因表达载体,利用IPTG对重组菌进行诱导表达,通过尿素洗涤纯化目的蛋白用于制备抗体． 相似文献
12.
给兔静脉注射苦参碱后,血药浓度——时间曲线呈双指数型,符合开放式二室模型,用“3P87”程序对数据进行药动学模型拟合,求得药动学参数为 T_(1/2α),1.37min;T_1/2β), T6.58min; CL,23.59ml /min/kg; Vd,2.61 L /kg 。大鼠口服苦参碱后,各组织中的药物含量依次为肾、肝、肺、脑、心及血;其48h 内尿、24h 内粪及12h 内胆汁中的原形药物累积排泄量分别占给药量的53.73%、0.36%及0.27%。兔静脉给药后,12h 内尿及胆汁中的原形药物累积排出量分别占给药量的9.39%及0.37%。 相似文献
13.
INTRODUCTION The difficulties associated with large-scaleproduction of biotherapeutics provide a constantchallenge to the biotechnology industry. FDA hadadded “therapeutic DNA plasmid vectors” to the listof well-characterized biotechnology product (DoHHs,1996), and gene therapy has moved rapidly fromlaboratory scale to clinical trials. It is urgent to de-velop new protocols to obtain high-quality plasmidswith high yields and minimal or no contamination ofRNA and chromosomal D… 相似文献
14.
利用RT—PCR技术从HEK293细胞中克隆到人Rab7基因,通过双酶切将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌E．coliDH5α感受态细胞,获得阳性克隆．24℃下IPTG诱导表达,Glutathi—one Sepharose 4B纯化后获得高纯度的Rab7蛋白．并以此为抗原免疫小白鼠,获得了Rab7的特异性抗体． 相似文献
15.
Li-rong CHEN Hong-wei ZHOU Jia-chang CAI Rong ZHANG Gong-xiang CHEN 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2009,10(5)
Objective: To investigate the mechanism of carbapenem resistance and the occurrence of plasmid-mediated quinolone resistance determinants qnr and aac(6')-Ib-cr in a clinical isolate of Enterobacter cloacae. Methods: An ertapenem-resistant E. cloacae ZY106, which was isolated from liquor puris of a female gastric cancer patient in a Chinese hospital, was investigated. Antibiotic susceptibilities were determined by agar dilution method. Conjugation experiments, isoelectric focusing, polymerase chain reaction (PCR), and DNA sequence analyses of plasmid-mediated carbapenemases and quinolone resistance determinants were preformed to confirm the genotype. Outer membrane proteins (OMPs) were examined by urea-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (Urea-SDS-PAGE). Results: Minimum inhibitory concentrations (MCs) of imipenem, mer-openem, and ertapenem for ZY106 were 2,4, and 16 ug/ml, respectively. Conjugation studies with Escherichia coli resulted in the transfer of significantly reduced carbapenem susceptibility. ZY106 produced IMP-1 metallo-p-lactamase and CTX-M-3 extended-spectrum P-lactamase, and E. coli transconjugant produced IMP-1. Plasmid-mediated quinolone resistance determinant qnrSI was detected in ZY106. Transfer of the qnrSI-encoding-plasmid into E. coli by conjugation resulted in intermediate resistance to ciprofloxacin in E. coli transconjugant. Urea-SDS-PAGE analysis of OMPs showed that ZY106 lacked an OMP of approximately 38 KDa. Conclusion: It is the first IMP-1-producing Enterobacteriaceae in China and the first report of a clinical isolate that harbors both blaIMP and qnrS genes as well. The blaIMP-1, blaCTX-M-3, and qnrSl are encoded at three different plasmids. IMP-1 combined with the loss of an OMP possibly resulted in ertapenem resistance and reduced imipenem and mero-penem susceptibility in E. cloacae. 相似文献
16.
Polyethylenimine-cyclodextrin-tegafur (PEI-CyD-tegafur) conjugate was synthesized as a novel multifunctional prodrug of tegafur
for co-delivery of chemotherapeutic agent tegafur and enhanced green fluorescent protein (EGFP) reporter plasmid DNA. Conjugation
of tegafur to PEI-CyD via chemical linkage was characterized by 1H NMR spectrometry and ultraviolet (UV) spectrometry. PEI-CyD-tegafur was able to condense plasmid DNA into complexes of around
150 nm with positive charge at the N/P ratio of 25, in accordance with electron microscopy observation of compact and monodisperse
nanoparticles. The results of in vitro experiments showed enhanced cytotoxicity and considerable transfection efficiency in
B16F10 cell line. Therefore, PEI-CyD-tegafur may have great potential as a co-delivery system with anti-cancer activity and
potential for gene delivery. 相似文献
17.
利用PCR技术从肝素黄杆菌克隆到肝素酶HepI基因,通过双酶切将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌E．coliBL21感受态细胞,获得基因工程重组菌．12℃下IPTG诱导表达12h,Glutathione Sepharose 4B纯化后获得较高纯度的HepI酶蛋白． 相似文献
18.
对虾白斑综合症病毒（WSSV）编码与核酸合成代谢相关的核糖核苷酸还原酶（Ribonucleotide Reductases,RR）,与病毒DNA的复制有关．利用克隆技术将RR基因克隆到L4440载体,构建体内合成dsRNA的大肠杆菌HTn5工程菌．诱导该工程菌合成了RR基因的特异双链RNA（RR—dsRNA）和非特异双链RNA（gfP—dsRNA）,分别与WSSV混合共注射凡纳滨对虾,在感染72h后用病毒检测试剂盒提取DNA模板用于荧光定量PCR分析,结果显示RR—dsRNA能有效抑制WSSV病毒粒子的增值． 相似文献
19.
本文通过对茶碱(2.0μg/ml),头孢三嗪(CTRX、10.0μg/ml)、CTRX(10.0μg/ml) 茶碱(2.0μg/ml)和CTRX血清抽提液(10.0μg/ml)的UV扫描及茶碱、茶碱 CTRX混合血清中茶碱回收率的测定,观察了CTRX对茶碱紫外双波长法测定的干扰情况。结果表明CTRX在280nm处有最大的吸收与茶碱有部分重叠吸收,紫外扫描结果表明其可能干扰茶碱的测定。但是回收率测定在治疗量范围内几种浓度的CTRX对茶碱的测定结果则无明显干扰作用(P>0.05),文中对此结果的可能性进行了讨论。 相似文献
20.
A high-performance liquid chromatographic (HPLC) method with ultraviolet (UV) detector had been developed for simultaneous quantification of danshensu, protocatechuie aldehyde, caffeic acid, salvianolic acid D, rosmarinic acid, salvianolic acid B and salvianolic acid A in Danshen injection. According to the UV spectra of these components, three detection wavelengths have been selected as follows: 280 nm for danshensu and protocatechuic aldehyde, 326 nm for caffeic acid, salvianolic acid D and rosmarinic acid, 286 nm for salvianolic acid B and salvianolic acid A. The limit of detection (LOD) was improved to be in the range of 0.008～0.160 μg/ml. Moreover, excellent linear behavior over the investigated concentration range was observed, with R>0.999 for all the analytes. 相似文献