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目的:应用全转录组芯片研究缺氧/复氧诱导下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转录组轮廓。创新点:血管内皮细胞(VEC)缺氧/复氧损伤被视定为许多生理和病理过程中导致器官功能障碍的重要驱动因素。然而,其详细病理生理机制和基因表达谱信息尚未阐明。本研究首次应用全转录组芯片技术研究VEC缺氧/复氧诱导下的转录组轮廓。方法:采用缺氧孵育3h后复氧1h的HUVEC为缺氧/复氧组,同时常氧孵育的HUVEC为常氧对照组。应用含58 339条探针的全转录组芯片检测每组三个样本。对差异表达基因进行生信分析和功能验证。结论:本研究发现372个有意义的差异表达基因探针。相关基因涵盖多种途径和功能,例如氧自由基的产生、钙超载、炎症、糖脂代谢、内皮细胞增殖、分化、细胞骨架及通透性调节、细胞裂解、凋亡和血管生成。另外,实验进一步表明,差异表达基因pleckstrin同源样域家族A成员1(PHLDA1)的m RNA和蛋白质表达结果与微阵列结果一致。STRING分析发现,PHLDA1可能与差异表达基因SLC38A3、SLC5A5、Lnc-SLC36A4-1和Lnc-PLEKHJ1-1具有物理性和/或功能性相互作用,这有望揭示VEC在缺氧/复氧环境下长链非编码RNA(lnc RNA)的相关机制。 相似文献
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Ji ZHU Lin-wen-si ZHU Jin-huan YANG Ying-ling XU Cui WANG Zhuo-yu LI Wei MAO De-zhao LU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2018,(6)
目的:应用双向电泳及质谱技术分析对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)蛋白质组的影响,探讨引起心血管毒性的潜在机制。创新点:多项流行病学调查表明,与人类心血管疾病有密切关系,而血管内皮细胞是血管的第一道防线。本项目应用蛋白质组技术研究对血管内皮细胞损伤的作用,并从DNA损伤的角度探讨了心血管毒性机制,具有较好的创新性。研究结果可为的危害分析提供基础数据,同时为的防治提供新的依据及思路。方法:培养HUVEC细胞,分为正常组(正常培养的HUVEC细胞)、处理组(50、100μg/mlPM_(2.5)处理HUVEC细胞24h)。双向电泳技术建立各组细胞蛋白质组图谱,质谱技术鉴定差异表达的蛋白质,流式细胞术分析细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测DNA损伤产物8-OHd G的水平,荧光标记技术分析DNA双链断裂的形成,并用免疫印迹法(Western blotting)检测DNA损伤相关蛋白的表达。结论:经处理HUVEC后,31个蛋白表达发生了显著性的变化(图2,表1),其中8个蛋白质参与了DNA的损伤与RNA的编缉,7个蛋白质与细胞凋亡有关(表2)。进一步实验表明:能够促细胞凋亡(图5),提高DNA损伤产物8-OHdG的含量(图6),促进DNA双链断裂位点的形成(图7),调节损伤修复相关蛋白(Mer11A、Rad50和Rad51)的表达(图8),抑制超氧化物歧化酶(SOD)的活性,增加HUVEC细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平(图9)。综上所述,能够通过调节一系列蛋白的表达,加重HUVEC细胞氧化应激水平,增加DNA损伤,促进细胞凋亡,造成内皮细胞损伤,从而导致心脑血管事件的发生。 相似文献
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1 DNA探针的概念
DNA探针是一段带有检测标记（如放射性同位素、荧光分子等）且顺序已知的与目的基因互补的核酸序列（DNA或RNA）,长度在几百碱基对以上。它包括整个基因或基因的一部分;可以是DNA本身,或由之转录而来的RNA。现已获得的DNA探针数量很多,有细菌、病毒、真菌、动物和人类细胞DNA探针。 相似文献
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目的:阐明油茶皂苷(SQS)所产生心肌保护作用与AE3蛋白的基因表达关系,方法:采用RNA i技术,在心肌细胞水平上建立AE3蛋白低表达、同时建立缺氧/复氧损伤(A/R)模型及SQS预适应模型;通过测定,心肌细胞的博动频律、细胞生存率以及细胞培养液中LDH的变化;同时检测心肌细胞中AE3 mRNA、AE3蛋白的表达变化,结果:SQS预处理能明显提高A/R损伤后细胞存活率,减少LDH的漏出,AE3 mRNA、AE3蛋白表达明显上调,与A/R组相比均有显著性差异(均p<0.01);结论:在心肌细胞中转导入三段有AE3基因序列特异性的dsRNA后,可引起AE3 mRNA及蛋白低表达,同时取消SQS预处理的心肌保护作用.为其进一步的新药开发提供理论与实验依据. 相似文献
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缺氧诱导因子-1研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是1992年Semenza和Wang[1]首先发现的,随后确立了HIF-1的结构,并证明了其cDNA的编码顺序.HIF-1普遍存在于人和哺乳动物细胞内,常氧下(21%O2)也有表达,但合成的HIF-1蛋白很快即被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解,只有在缺氧条件下HIF-1才可稳定表达[2].HIF-1是具有转录活性的核蛋白,具有相当广泛的靶基因谱,其中包括与缺氧适应、炎症发展及肿瘤生长等相关的近100种靶基因[3,4].当其与靶基因结合后,通过转录和转录后调控使机体产生一系列反应,有些反应尽管带有适应代偿性质,但也常给机体带来病理性损害,如低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)、肿瘤加速生长等. 相似文献
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1基因沉默基因沉默是生物体内特定基因由于种种原因不表达或表达量极低的遗传现象。一般认为基因沉默有三种情况:位置效应的基因沉默、转录水平的基因沉默和转录后水平的基因沉默。RNA干扰(RNA interference,RNA i)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)时,该mR-NA发生降解而导致基因表达沉默的现象,这种现象发生在转录后水平,又称为转录后基因沉默。题1 2006年诺贝尔生理学奖授予美国科学家安德鲁·法尔和克雷格·梅洛,以表彰他们发现了RNA… 相似文献
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《学周刊C版》2017,(16):25-26
目的:观察探讨C35在肝癌中的表达与靶向干预,为临床治疗提供依据。方法:设计两对C35编码区的si RNA并合成,构建到转录载体p TZU6+1上,形成重组质粒siRNA-C35,在脂质体介导下转染肝癌细胞株,RT-PCR分析RNA干扰后mRNA的变化,Western blot检测表达蛋白的变化。结果:扩增的目的基因条带亮度存在明显差异,与对照组相比,转染质粒pTZU6+1相对表达率为95.3%、siRNA1组相对表达率为40.0%,siRNA2组的相对表达率为28.4%。构建的重组质粒对C35mRNA的表达有抑制作用。只转染脂质体组和pTZU6+1的C35蛋白杂交带强于siRNA1和siRNA2,证实重组质粒可以抑制C35基因的表达,以对照组的蛋白带为标准,其图像分析可知,转染质粒pTZU6+1相对表达率为94.9%、siRNA1组相对表达率为29.6%,siRNA2组的相对表达率为32.2%。结论:通过设计C35基因敲除的si RNA可有效抑制C35基因的表达,肝癌细胞生长速度及侵袭性均发生改变,但C35基因在肝癌细胞株中及肝癌组织中低表达,不可作为肝癌的靶点干预基因。 相似文献
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《莆田学院学报》2016,(2):10-14
探讨参附汤对阿霉素心脏毒性损伤大鼠细胞凋亡相关基因转录水平的影响。采用实时荧光定量PCR法测定大鼠心肌组织Bax、Bcl-2和Caspase-3 m RNA的转录水平。结果表明,阿霉素心脏毒性损伤模型大鼠与对照组相比,Bax和Caspase-3 m RNA的转录水平均提高,而Bcl-2 m RNA的转录水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。参附汤组与模型组相比,Bax和Caspase-3 m RNA的转录水平均降低,而Bcl-2 m RNA的转录水平提高,差异有统计学意义(P<0.05)。阿霉素心脏毒性损伤与心肌细胞凋亡有关,参附汤通过调节细胞凋亡相关基因表达水平来改善心肌毒性损伤,达到保护心肌的功能。 相似文献
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针对设备故障预测模型难以精确建立的特点,为提高故障间隔时间预测的精确度,提出了变周期三角函数-灰色模型GM(1,1)的预测方法。该方法在三角函数-灰色模型GM(1,1)基础上,建立了变周期三角函数—灰色GM(1,1)的组合模型,实现了对设备故障间隔时间的预测;并将预测结果与三角函数-灰色模型GM(1,1)进行对比,结果表明,采用变周期三角函数-灰色模型GM(1,1)对故障间隔时间进行预测,其预测结果的相对误差由24.16%降到3.24%,提高了预测结果的精度。 相似文献
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Wang K Zhang M Qian YY Ding ZY Lv JH Shen HH 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2011,12(10):828-834
Objective
Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) are correlated with a more malignant phenotype in many cancers. This study was designed to evaluate the predictive value of the expression of MAPK phosphatase-1 (MKP-1) and phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2 (p-ERK1/2), as the key regulatory mechanism of the MAPKs, in lung squamous cell carcinoma (SCC). 相似文献14.
Maintenance of cellular homeostasis and genome integrity is a critical responsibility of DNA double-strand break(DSB)signaling.P53-binding protein 1(53BP1)plays a critical role in coordinating the DSB repair pathway choice and promotes the non-homologous end-joining(NHEJ)-mediated DSB repair pathway that rejoins DSB ends.New insights have been gained into a basic molecular mechanism that is involved in 53BP1 recruitment to the DNA lesion and how 53BP1 then recruits the DNA break-responsive effectors that promote NHEJ-mediated DSB repair while inhibiting homologous recombination(HR)signaling.This review focuses on the up-and downstream pathways of 53BP1 and how 53BP1 promotes NHEJ-mediated DSB repair,which in turn promotes the sensitivity of poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor(PARPi)in BRCA1-deficient cancers and consequently provides an avenue for improving cancer therapy strategies. 相似文献
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Yang Li Hang Yan Wu-jun Xue Pu-xun Tian Xiao-ming Ding Xiao-ming Pan Xin-shun Feng Xiao-hui Tian He-li Xiang Jun Hou 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2009,10(11):820-828
Objective: To explore the effects of cytomegalovirus (CMV) infection on rejection-related gene expression in the endothelial cells of renal transplantation recipients. Methods: Endothelial cells (ECs) were cultured and stimulated by a variety of factors: A, normal control group; B, inactivated human cytomegalovirus (HCMV) infection group; C, HCMV infection group; D, HCMV supematant infection group; and E, ganciclovir HCMV group. Expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and major histocompability complex (MHC) class Ⅰ and class Ⅱ antigens was detected by flow cytometry (FCM) and immuno-histochemistry. Results: We found characteristic CMV-infected ECs in this study. There were no significant differences among groups A, B and D (P>0.05). Although the expression levels of ICAM-1 were not significantly different between groups C and E (P>0.05), the ICAM-1 expression in these two groups was significantly higher than that in group A (P<0.05). ICAM-1 expression was detected in groups C and E, while there was no expression in groups A, B and D. Furthermore, there was no significant difference of ICAM-1 mRNA expression between groups C and E (P>0.05). Human leucocyte antigen (HLA)-ABC expression was detected in all the groups, while HLA-DR expression was only detected in groups C and E. There were no significant dif-ferences of HLA-ABC and HLA-DR expression among groups A, B and D (P>0.05). However, the HLA-ABC and HLA-DR expression levels in groups C and D were higher than those of the remaining groups previously reported (P<0.05). Meanwhile, the HLA-ABC and HLA-DR expression levels in group E were lower than those of group C (P<0.05). Conclusion: CMV could up-regulate the expression levels of ICAM-1 and MHC antigens, which was closely related to allograft rejection. 相似文献
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Yan-xia Ning Shun-lin Ren Feng-di Zhao Lian-hua Yin 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2010,11(5):350-356
Objective:To determine the effect of steroidogenic acute regulatory protein(StAR) overexpression on the levels of adenosine triphosphate(ATP)-binding cassette transporter A1(ABCA1) and ATP-binding cassette transporter G1(ABCG1) in an endothelial cell line(bEnd.3).Methods:The StAR gene was induced in bEnd.3 cells with adenovirus infection.The infection efficiency was detected by fluorescence activated cell sorter(FACS) and fluorescence microscopy.The expressions of StAR gene and protein levels were detected ... 相似文献
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Ruszkowska B Sokup A Kulwas A Socha MW Góralczyk K Góralczyk B Rość D 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2012,13(1):35-42
Objective
In postmenopausal women, an increased leptin concentration and reduced levels of ghrelin and adiponectin were observed. The aim of this study was to evaluate the concentrations of the active form of ghrelin, total ghrelin, leptin receptor, lipoprotein(a) (Lp(a)), and plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) in postmenopausal women who received oral or transdermal menopausal hormonal therapy (MHT). 相似文献19.
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低氧诱导因子与乳腺癌转移 总被引：2，自引：0，他引：2
Zhao-ji LIU Gregg L.SEMENZA Hua-feng ZHANG 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2015,(1):32-43
概肿瘤,特别是实体瘤,其内部微环境处于一种低氧或缺氧的状态,肿瘤的这种低氧微环境将诱导活化低氧诱导因子（HIF-1）信号通路。HIF-1信号通路在乳腺癌的转移中发挥着重要的作用。乳腺癌的转移涉及肿瘤细胞的浸润、进入血管、通过血液循环迁移、到达远端毛细血管内壁、穿透血管壁进入新的器官以及在新的部位形成转移灶等步骤,过程非常复杂。本文重点围绕 HIF-1在转移各个步骤中的作用进行综述。 相似文献