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以自交亲和芸芥7-5-1-1为研究材料,对影响芸芥花药愈伤组织诱导的主要因素进行了初步研究.结果表明:MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA是诱导芸芥花药愈伤组织适宜的培养基;芸芥花药在离体培养前最佳低温(4℃)预处理时间为2d,诱导率可高达46.2%;在诱导期间始终处于弱光或完全黑暗条件下的花药愈伤组织诱导率最高;单核期花药的愈伤组织诱导率最高,与单核前期、双核期花药的愈伤组织诱导率相比,差异达到极显著水平. 相似文献
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选择Trizol法、热酚法、酵母RNA提取试剂盒法3种方法提取热带假丝酵母总RNA,通过对总RNA进行质量浓度和纯度分析,比较不同方法对热带假丝酵母总RNA提取的影响.结果表明:使用酵母RNA提取试剂盒法提取热带假丝酵母总RNA是较为有效且简便的方法. 相似文献
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骆驼刺具有抗寒、抗旱、耐盐和抗风沙的特性,是一种非常好的生物性抗逆研究材料.通过比较CTAB法、热硼酸法和Trizol法来提取骆驼刺叶片总RNA的效果,结果表明,Trizol试剂盒法提取的RNA纯度较高,电泳条带清晰完整,OD360/OD280比值为1.91,并将其确定为骆驼刺叶片总RNA提取的方法,反转录合成cDNA第一链,利用设计的NHX1引物,PCR扩增得到一条600～800bp的DNA条带,与报道的NHX1基因的核心序列大小基本相符,验证了提取的RNA可用于RT-PCR,为骆驼刺的抗逆性研究奠定基础. 相似文献
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昆明小鼠不同组织RNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
利用改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良的TRlpure试剂盒法对昆明小鼠心脏、肝脏以及肾脏进行组织总RNA的提取,比较其提取效果,结果显示,试剂盒提取效果普遍明显优于其它方法且适用于肝脏总RNA的提取,传统方法的改良适用于肾脏总RNA的提取,心脏总RNA的提取效果均不理想。 相似文献
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《实验技术与管理》2013,(11)
目的:探索一种提高总RNA提取浓度的方法。方法 :用Trizol方法分别提取乳腺癌细胞和心肌组织中的总RNA。在提取过程中,分别把加入异丙醇后的混合液8等份,其中4个样品管分别在室温、4℃、-20℃、-80℃下放置10min,另外4个样品管在-80℃冰箱中分别放置0.5、1、2、4h;然后检测提取到的总RNA质量浓度、纯度及完整性。结果:均放置10min时,提取的总RNA质量浓度随放置温度的降低而增加(P≤0.01);放置于-80℃时,随放置时间的增加,提取的总RNA浓度增加(P≤0.01)。两种条件下提取的总RNA的纯度均无显著性差异(P>0.05),其完整性也无明显影响。结论:不同的放置时间和温度会影响RNA提取的质量浓度,但对RNA纯度和完整性无明显影响。 相似文献
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苹果RNA提取方法的探索 总被引：2，自引：0，他引：2
文章采用TRIZOL试剂快速提取法、CTAB法、改良CTAB法、RNAisoTM试剂盒法等四种方法以苹果枝条形成层区组织为材料提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度仪检测来分析RNA质量。结果表明改良CTAB法是最适的苹果形成层组织的RNA提取方法,并得到高质量的总RNA,经反转录、PCR途径克隆到苹果生长素结合蛋白基因,为在基因水平上探索苹果生长发育机理奠定了基础。 相似文献
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拟南芥总RNA的简便提取与效果分析 总被引：4，自引：0，他引：4
金美芳 《福建师大福清分校学报》2007,(2):16-18
以COL-0型野生型拟南芥菜为材料,使用枪头在1.5ml的Eppendorf管中直接捣碎的方式,用Trizol试剂提取总RNA。通过总RNA的纯度、浓度测定及琼脂糖凝胶电泳分析提取效果。测定结果表明样品纯度分别达到1.9843和1.9741,浓度分别为1.2061μg/μl和1.1187μg/μl,电泳结果显示总RNA的28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA三条带清晰、无拖尾。与研钵研磨材料比较,此方法简便、需要材料少、降低了提取过程中RNA的降解几率。 相似文献
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文章采用改良的异硫氰酸胍法提取南方红豆杉枝叶总RNA,通过甲醛变性凝胶电泳,可见3条比较明显的rRNA条带,其中28SRNA条带的亮度大约为18SRNA的2倍,说明总RNA样品的完整性良好。紫外吸收值测定,A260/A280比值介于1.7到2.0之间,A260/A230比值大于2.0,得到较为典型的RNA吸收值,说明酚类、蛋白质和无机盐等杂质已排除。此方法简便易行,能得到纯度高、质量好的RNA。 相似文献
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植物组织总RNA提取的常用方法及优化策略 总被引：3，自引：0，他引：3
讨论了植物组织总RNA提取的常用方法及检测技术，并对如何消除酚类物质、多糖、蛋白质等对RNA提取的干扰以及降低RNase对RNA的降解作用进行了较详细地阐述． 相似文献
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目的:采用Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA电转染人外周血树突状细胞(Dendritic Cell,DC),观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法:通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用细胞因子体外培养诱导其成为DC。Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入DC内;通过混合淋巴细胞实验,获取DC激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞的增殖率。结果:电转染方法可将人肝癌细胞总RNA导入DC;电转染前后DC分子表达无显著差异。转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异的激活T细胞且增殖率明显增强(P<0.05)。结论:电转染为人肝癌细胞总RNA导入DC提供技术上的可行性;转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异激活T细胞。 相似文献
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一种高质量蜜蜂核酸的快速提取方法 总被引：7，自引：0，他引：7
基因组DNA的提取是蜜蜂分子生物学研究的一项基本而重要的技术，但由于蜜蜂样品具有脂肪、蛋白、几丁质含量很高的特点，所以用常规方法无法获得较高质量的DNA，文章研究对蜜蜂基因组DNA的提取方法作了重要改进，可以从不同发育时期的蜜蜂中快速、大量提取高质量的蜜蜂基因组DNA，此外，对蜜蜂总RNA的提取方法也进行了探索。 相似文献
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目的:为充分利用大头艾纳香植物资源,避免资源的浪费,探讨大头艾纳香提取物中总黄酮的提取工艺.方法:采用超声波提取法从大头艾纳香中提取总黄酮类物质,通过正交与单因素实验,确定了大头艾纳香中总黄酮类物质提取的最佳工艺.结果:通过正交与单因素实验得到的工艺最佳条件是:浓度为65%乙醇,固液比为l:20,超声波时间30min,总提取3次,浸泡24h.在这种条件下,提取率最高,总黄酮得率可达4.417%.结论:这种提取工艺重现性好,简单可行,对工艺进一步的开发有很好的参考价值. 相似文献
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通过探讨强、弱势粒结实率和充实度与mRNA/总RNA的关系,分析水稻强势粒和弱势粒结实率和充实度差异的机理,旨在提高水稻结实率和充实度.结果发现：弱势粒中总RNA含量和单粒含量与强势粒差异不大,mRNA、蛋白质含量和单粒含量以及mRNA与总RNA之比低于强势粒.mRNA/总RNA与强弱势粒结实率和充实度一致,mRNA/总RNA低是弱势粒结实率和充实度低的原因.因为mRNA/总RNA排除了籽粒灌浆的稀释作用,反映了水稻籽粒灌浆过程中基因转录活性的高低,与籽粒灌浆趋势一致,所以将其作为库活性的指标是适宜的. 相似文献
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目的:在超积累植物东南景天对镉的区隔化过程中,叶肉细胞等内含大型液泡的薄壁细胞起重要作用。本文旨在建立并优化其叶肉细胞原生质体和液泡的提取和纯化技术,在技术层面上为东南景天的镉区隔化机理研究奠定基础,有助于深入探明其超积累镉的生理与分子机理。创新点:优化了东南景天叶片原生质体的提取和纯化技术,并建立了能较高效率获得膜完整性好、数量多、纯度高的液泡提取方法。方法:主要包括原生质体提取、液泡粗提和液泡纯化。原生质体提取:取东南景天叶片,切成1~2 mm的细条状后浸入经预热过的细胞裂解液中,震荡2 h后过滤,离心清洗后获得原生质体。液泡粗提:采用1-丙磺酸浓度为0.675 mmol/L的原生质体裂解液裂解原生质体,离心后获得粗提的液泡,并加入含0.8 mol/L甘露醇的液泡保护液。液泡纯化:往初提液泡的悬浮液下层加入质量体积比浓度为0.10 g/ml的Ficoll溶液,进行密度梯度离心,获取纯化的液泡。结论:细胞裂解液的预热处理可加速细胞壁降解,裂解时间设置为2 h有利于原生质体的高效提取;通过对原生质体裂解液浓度、细胞保护液浓度和梯度离心等参数的改良,可有效提取叶片细胞原生质体中的液泡。 相似文献