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1.
昆虫杆状病毒表达系统于1983年建立,迄今已有近千种外源基因在该系统中获得高效表达.本文对杆状病毒载体表达系统的原理、特点及近年来的发展与应用等作一综述. 相似文献
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昆虫杆状病毒在生物技术研究中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
随着昆虫杆状病毒分子生物学研究的不断深入，昆虫杆状病毒在生物技术研究中也得到了应用。利用杆状病毒作为载体，在昆虫细胞和虫体内表达外源基因，形成了昆虫杆状病毒载体表达系统，利用杆状病毒携带外源基因，通过同源重组将外源基因导入到家蚕的基因组构建了转基因家蚕；通过向杆状病毒基因组中插入毒素、激素、酶抑制剂等的基因或从杆状病毒基因组中删除某个基因，或通过不同杆状病毒间的杂交，使子代病毒的宿主域扩大，从而提高了杆状病毒作为生物杀虫剂的杀虫效果。本文对杆状病毒在上述几个方面的应用进行了简要综述。 相似文献
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sfaMNPV是新近从美国引进的一株杆状病毒,它能感染多种鳞翅目昆虫．本实验成功地利用它感染了小菜蛾、棉铃虫和甜菜夜蛾三种昆虫的幼虫,扩大了它的宿主范围．并测定了它对这三种昆虫的毒力．结果表明,SfaMNPV不仅能感染这三种昆虫,且能在这三种昆虫幼虫体内大量增殖,能作为这三种昆虫的生物杀虫剂使用． 相似文献
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灰斑古毒蛾核型多角体病毒几丁质酶基因及其分子进化 总被引：5，自引：0，他引：5
通过对构建的灰斑古毒蛾Orgyia ericae单粒包埋型核型多角体病毒(OrerSNPV)基因组DNA的EcoRI酶切片段质粒文库的测序分析,在EcoRI—J片段(6．4kb)中鉴定出了编码几丁质酶(ChiA)基因开放阅读框(ORF),chiA基因编码区由1695bp组成,编码564个氨基酸,预计蛋白质分子量为62kD。这也是首次在基因序列水平上研究OrerSNPV。将OrerSNPV ChiA氨基酸序列与其它已知的18种杆状病毒ChiA氨基酸序列联配比较,结果表明OrerSNPV与其它杆状病毒ChiA氨基酸有60．3—69．5％同源性,其中与BmNPV、CfDEFNPV和LdMNPV的同源性最高。根据氨基酸序列绘制的分子进化树表明杆状病毒chiA基因至少可以分为SlMNPV、GV和其它NPV三个分支,OrerSNPV与LdMNPV在进化树上关系最为接近。 相似文献
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家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
对家蚕核型多角体病毒苏州株（ＢｍＮＰＶｓｕ）ｐ３５基因的序列分析表明：ＢｍＮＰＶｓｕ ｐ３５编码序列为８９７ｍｔ,编码２９８ａａ。同源性分析表明：ＢｍＮＰＶｓｕ ｐ３５与ＢｍＮＰＶＴ３、ＡｃＮＰＶ 、ＳＩＮＰＶ在核苷酸水平上同源性分别为９９．５％、９５．１％、８９．３％,在氨基酸水平上的 性分别为９８．７％、８９．４％、７６．４％,显示了杆状病毒ｐ３５基因在进化上的保守性。ＢｍＮＰＶＴ３中位的Ｎ１ 相似文献
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目的:探究大口黑鲈弹状病毒株与其他已知弹状病毒的差异,构建该病毒糖蛋白的杆状病毒表达系统,用于后续口服疫苗的研发。创新点:基于获得的大口黑鲈弹状病毒的全基因组序列,并利用杆状病毒表达系统获得了高丰度的病毒糖蛋白,可结合家蚕用于后续口服疫苗的研发。方法:利用c DNA末端快速扩增法(RACE)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术获得了病毒的部分序列,拼接获得了病毒的全基因组序列。通过ClustalW比较该病毒与已知弹状病毒的3'leader及5'trailer序列差异,进一步利用MEGA软件比较该病毒全基因组序列与其他鱼类弹状病毒的差异,确定其系统进化树中的分支及地位。基于糖蛋白序列分析结果,利用杆状病毒表达载体构建该病毒的糖蛋白表达系统,感染昆虫卵巢细胞(SF9)后,借助荧光定量PCR(q RT-PCR)、免疫荧光及蛋白质印迹法(western blot)等技术确定病毒增殖及糖蛋白的表达情况。结论:该大口黑鲈弹状病毒株全长11 526 bp,且与鳜鱼弹状病毒为同一分支,属于水泡病毒属。构建的病毒糖蛋白杆状病毒表达系统成功在SF9细胞中表达了高丰度的糖蛋白。 相似文献
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养殖斑节对虾红体病病原及组织病理研究 总被引：3，自引：0，他引：3
养殖班节对虾红体病病原经组织病理、电镜观察和白斑杆状病毒PCR检测，初步证实是一种枝原体．枝原体高度多态性，主要以球状体和分枝丝状体形式存在．球状体直径60～108um，分枝丝状体膨大部直径达150um，丝状部为25um．枝原体主要寄生在斑节对虾肝胰腺上皮细胞、造血组织细胞、鳃上皮细胞、甲壳表皮细胞等，致肝胰腺萎缩糜烂．受感染细胞细胞质空泡变性，细胞核固缩解体，内质网、高尔基体和溶酶体消失．对红体带白斑斑节对虾、白斑（无红体特征）斑节对虾和红体（无白斑特征）斑节对虾组织病理、电镜和白斑杆状病毒PCR检测，证实斑节对虾红体病不是由白斑杆状病毒引起，红体斑节对虾具有白斑杆状病毒是病毒继发感染所致． 相似文献
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以CAT基因为报道基因,探讨了杆状病毒后期启动子在大肠杆菌中启动表达CAT基因的活性。结果显示在不含多角体基因及其启动子的质粒中,具合成启动子的表达量最高,野生型多角体启动子的表达量次之,而含ⅩⅣ多角体启动子的最低;具相同CAT基因启动子的质粒中,含多角体蛋白基因及其野生型启动子者较不含者强,含合成与ⅩⅣ启动子串联组合者与单纯ⅩⅣ启动子者表达量近乎一致,但均较前者为弱。以上结果表明,杆状病毒后期启动子在大肠杆菌与在昆虫细胞中的启动表达的能力并非完全一致。 相似文献
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人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a( ),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒Bm-Bac-hIGF-Ⅰ。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫血淋巴中可以检测到一条分子量约为7.5 kD的特异性条带,ELISA检测表达量达4.51μg/mL蚕血淋巴。 相似文献
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0 前言 人的PAI—2是一种通过抑制纤溶酶原激活物来调节纤溶酶原激活过程的特异抑制网子。生化性质研究和临床应用需要大量的PAI—2蛋白,但通过纯化大规模培养的细胞上清和胎盘抽提液而获取PAI—2是很困难的。在大肠杆菌和哺乳运动细胞中也尚未获得高效表达。我们考虑到用昆虫杆状病毒表达载体系统(Bacul—ovir us expression vector system:BEVS)进行表达。 BEVS是一种比较新的载体宿主表达系统,它与细菌、酵母及哺乳动物细胞表达系统相比具有以下几个方面的优点:1)允许插入的外源基因容量较大;2)能高效表达。重组蛋白达到1～500mg/L;3)应用范围广泛。可以表达各种胞内、分泌和膜蛋白。如用的是多角体蛋白启动于为晚期启动子,可表达一些具有细胞毒作用的蛋白;4)通过双启动于载体或两种不同重组病毒共同感染细胞,可获得多种蛋白的同时表达;5)重组病毒可通过穿刺感染或与野生病毒共包装,形成具有多角体外壳的重组病毒口服感染幼虫,从而在虫体中表达。表达量常比胞内高10～100倍;6)安全。杆状病毒具有严格的宿主专一性,不感染脊椎动物或植物;7)表达蛋白与天然蛋白相似。可以进行高等真核细胞内的蛋白修饰,剪接及运输。 BEVS中作为基因表达载体的病毒是苜蓿尺蠖核型多角体病毒(ACNPV)和家蚕核型多角 相似文献
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以含翻译起始密码子ATG的质粒pSⅪⅤⅥ Ⅹ3/4为转移载体,将多角体蛋白及切除部分5′和3′端的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)基因同时插入粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)基因组中,构建了形成多角体的重组毒株。该毒株能利用合成—多角体ⅪⅤ串联启动子,表达由截短的HBcAg序列及其上下游多接头与杆状病毒DNA部分序列组成的融合蛋白基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Wcstern印迹与免疫电镜观察的结果表明,融合蛋白基因表达产物的分子量约20.5KD,与理论计算值相符,并保留了HBcAg的抗原性,亦能形成典型的HBcAg颗粒。组建含多克隆点及截去两端序列的HBcAg基因转移载体质粒,使编码多肽抗原的寡聚核苷酸易于克隆,以HBcAg融合蛋白方式在杆状病毒载体系统中表达,并能形成HBcAg为蛋白载体的抗原颗粒结构。 相似文献
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斜纹夜蛾幼虫感染核型多角体病毒后血细胞的病理变化 总被引：2，自引：0，他引：2
斜纹夜蛾幼虫感染NPV后,血细胞总数和浆细胞、小球细胞数量显著增加,浆细胞发生病变,在Glemsa染色中核失去颗粒特性,并出现多核,其中产生的多角体由周缘开始积聚。在充满多角体后核失去嗜酸性。多角体也存在于胞质之中。 相似文献
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茶卷蛾质型多角体病毒核酸用热酚法从提 病毒多角体中提取。紫外吸收光谱测定最高最代的吸收值分别在２６０ｎｍ和２３０ｎｍ处。经测定其Ｔｍ值为７９℃，在３％聚 烯酰 凝胶中，经电泳ＨｍＣＰＶＲＮＡ可分离得到１０条基因片段，各片段大小为０．３４×１０＾６－２．５５×１０＾６， 相似文献
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虚词“咧”在张掖方言中的使用频率较高,是一个比较重要的虚词。本文主要探讨它在该方言中出现的条件及其所表达的语法意义:帮助表达语气;帮助表达动态。 相似文献
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采用石蜡切片和电镜技术检测了发病塘的养成期日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）２０尾,发现２尾感染了斑节对虾杆状病毒,１１尾感染了日本对虾中肠腺坏死杆状病毒（ＢＭＮＶ）．结果表明,日本对虾的发病主要由ＢＭＮＶ感染所致 相似文献
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古今汉语的体系统分属综合式和分析式两种语言类型,先秦汉语的体意义主要隐含在动词情状之中,体意义到近代汉语才由体标记呈现出来。先秦的“矣”“方”等小品词的体标记地位不能得到当时语料的普遍证明,故不是当时主要的体表达手段。 相似文献
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基于语料库的中国手语象似性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
将中国手语里的207个斯瓦迪士核心词建成语料库,然后分析研究象似性在中国手语词汇层面的表现和特点。总结出七种象似手段：直接表达、用手表达所指的形状、用手表达所指的动作、用身体表达所指的动作、从其他语言系统借词（比如汉字、汉语拼音）、用辅助口语的手势表达、通过创建一个相关情形表达。有一小部分词象似性不明显或根本看不出象似性。中国手语虽然展现出丰富的象似性,却依然表现为象似性和任意性的连续体。 相似文献
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