克雷伯氏菌中群体淬灭基因kplD6的克隆表达与酶学特性分析     

刘栋  赵一竹  杨惠婷  李亚茹  董新姣 《温州大学学报(社会科学版)》2023,(1):44-53

群体淬灭酶是一类阻碍细菌间群体感应交流机制的重要物质,可以使信号分子降解或失活,从而阻止群体感应交流,进而破坏微生物多种行为和活动．前期研究中发现Klebsiella sp. Q2是具有群体淬灭能力的细菌,对其进行基因组测序分析后,选取该菌株中一个预测具有群体淬灭功能的基因（命名为kpl D6）作为研究对象,进行基因克隆、异源表达、蛋白纯化、结构预测、活性检测和酶学特性分析．结果表明,kpl D6基因全长1 080 bp,编码蛋白质由334个氨基酸组成,相对分子质量37 kDa,理论等电点为5.25,是一种具有TIM-barrel结构的磷酸三酯酶类内酯酶,最适pH为7,最适温度为45℃,Mn2+和Co2+等金属离子可以显著增强该酶活性．这对阐明Q2菌的群体淬灭功能的分子调控机制提供了更多信息．  相似文献   

金属离子对群体感应淬灭菌Serratia sp.Z4中AisZ酶的影响     

赵一竹  刘栋  杨惠婷  李亚茹  葛世玫 《温州大学学报(社会科学版)》2023,(2):38-46

微生物通过信号分子的传递来进行群体感应交流从而调控多种生理行为活动．群体感应淬灭菌体内具有的群体感应淬灭酶可以降解信号分子,从而破坏群体感应系统,对微生物的多种活动产生影响．前期从群体感应淬灭菌Serratia sp.Z4(沙雷氏属)中克隆到一个群体感淬灭基因ais Z并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行了异源表达．现以ais Z基因为研究对象,以异源表达菌株E.coli BL21(DE3)/AisZ-pET-28a(+)为实验材料,通过在0.1 mmol/L的IPTG诱导菌株表达时,分别添加Zn²⁺、Ca²⁺和Co²⁺等三种金属离子,从SDS-PAGA直接观察蛋白条带、生物传感器平板检测菌株对信号分子的降解、RT-qPCR检测ais Z的表达量三个方面来探究金属离子对淬灭酶AisZ的影响．结果表明,AisZ异源表达菌株在IPTG诱导时,加入0.2 mmol/L的Ca²⁺或Co²⁺都会抑制淬灭酶基因ais Z的表达,但Ca²⁺  相似文献