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目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用. 相似文献
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目的是建立一种简便、快捷的脆性X染色体综合征的临床检测方法.在常规PCR的基础上,采用热启动法,同时加入PCR增强剂Btaine、DMSO,对20例表型正常人群外周血样本进行FMR1基因（CGG）n重复序列检测.结果表明,改良后的FMR1基因PCR扩增技术能够高效扩增CG富集区,采用该方法我们检测了20例外周血样本均获得目标片段,PCR扩增产物片段长度400～500bp（相当于n=20～53）.因此,该方法简便、快速、经济而且重复性好,可用于群体普查和门诊快速筛查脆性X染色体综合征. 相似文献
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生物分子系统学研究中的RAPD技术 总被引：1，自引：0，他引：1
RAPD技术在Williams等人于1990年首先提出后,在检测DNA多态性方面受到了广泛的应用.RAPD技术以其简单、快速、信息量大等特点渗透在基因诊断,法医检测,生物药品的检验,生物种群关系的研究各个领域.以核酸为指标构建的生物系统进化树,不受主观因素的影响,避免了经典植物系统学的人为影响因素,因而受到广泛应用,在分子系统研究中出现了RFLP,RAPDDNA和RNA测序等分子生物学技术,其中RAPD技术不需要经过DNA分子克隆、分子杂交等繁锁步骤,也不需用放射性同位素显示,并且多态性检出率高,因而受到普遍关注. 相似文献
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影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素 总被引：1，自引：0，他引：1
研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。 相似文献
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崔雨荣 《内蒙古师范大学学报(教育科学版)》1998,(4)
遗传学认为,DNA是人体性状及遗传变异的物质基础,它是遗传信息的携带者.DNA决定着我们的肤色、性别、身高、健康状况等个体特征.每个人的DNA都是不完全一样的.在法医学上,往往需要鉴别现场留下的物证是否属于犯罪嫌疑人.传统的方法主要是通过指纹、脚印、唇纹、化学物质等物证进行核对,这在一些情况下能起到作用.然而,有时候犯罪分子相当狡猾,或者现场被破坏的很严重,根本找不到上述痕迹.但是在理论上,只要犯罪分子在现场留下血渍、精斑、头发、阴毛、唾液等,通过分析其中的DNA,仍可查获真凶.另外,也可通过分析在现场找到的死者的残留物(如毛发、牙齿、骨骼等)中所含的DNA,来验明他们的真实身份.以前由于这些物证中DNA的含量甚微,再加上无法排除在分析时受到的干扰,DNA分析还或多或少是一种幻想.直到1985年,诺贝尔奖获得者Kary mullis发明了聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR).再加上1988年Saiki对PCR的重大改进,才使DNA分析在法医学领域的应用取得了惊人的突破.所谓PCR,就是通过特定的DNA序列作为引物,在酶的作用下,经过几十次循环,使目的DNA得以快速复制、扩增,从而得到足以进行检测和分析的目的DNA片段.目的DNA(或称模板DNA)就好象是“轮子”,引物好象有汽车的“方向”,酶好象是“(?)力 相似文献
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本研究采用分光光度法及琼脂糖凝胶电泳比较从黑熊组织、血液以及毛发中提取的黑熊基因组DNA,发现提取的DNA浓度及纯度均可满足后续试验的需要。其中毛发DNA提取方法具有高灵敏度、操作简单、非损伤等特点,有助于开展珍稀濒危物种和性情凶猛动物的遗传特性研究。本文还根据文献中黑熊的11个微卫星位点设计并合成引物,进行了不同引物PCR最佳反应条件的筛选。对黑熊DNA基因组PCR扩增结果发现其中10对引物能扩增出较明显的扩增带,为后续的黑熊亲子鉴定及遗传特异性分析实验提供了有价值的资料,为其亲权概率的准确性提供了良好的参考依据。 相似文献
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Ipsita Choudhury R. Jothimalar Arun Kumar Patra 《Indian journal of clinical biochemistry : IJCB》2012,27(3):265-269
Hypertension, a well known risk factor for various cardiovascular, peripheral vascular and renal events is an important public health challenge. Renin angiotensin system (RAS) being the most vital pathogenic mechanism of hypertension is mediated by a key component; the angiotensin converting enzyme (ACE). The present study was aimed to know the relationship of ACE gene polymorphism and the possible risk of development of hypertension in south Indian population. The study included 101 clinically diagnosed hypertensive patients without any associated disease condition and 81 age and sex matched apparently healthy controls. Genotyping was performed using a polymerase chain reaction, (PCR) amplification of the intron 16 fragment harboring the 287 bp Alu repeat sequence. Three possible genotypes D/D, I/I homozygous and I/D heterozygous were analyzed where the D/D genotypes corresponds to higher ACE levels (D-Deletion, I-Insertion). The PCR products were separated on 2 % agarose gel. Statistical analysis was performed using SPSS.15 software program. We found a significance in frequency of D/D genotype in the hypertensive patients compared to the control group (p = 0.0005, odd’s ratio = 4.157). This suggested that ACE (D/D) genotypes are more prone for the development of hypertension. This is relatively a pilot study; but nevertheless may assist in identifying the pathophysiological cause of hypertension. 相似文献
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目的：探讨不同ApoE基因型人群对适宜健骨运动处方防治原发性骨质疏松的敏感性，为制定基于基因多态性的个性化运动处方提供理论依据。方法：74名原发性骨质疏松患者按ApoE基因型随机分为ε2组、ε3组和ε4组，进行为期3个月的有氧及抗阻运动训练，双能x线骨密度吸收仪（DxA）测定运动前后骨矿含量、腰椎（L2-4及髋部骨密度（BMD）的变化。结果：ε4组BMC运动前后的变化率高于ε2组0P〈0．05）；L2-4BMD运动前后无显著变化；ε4组髋部BMD运动前后的变化率显著高于ε2组（P〈0．05）。结论：运动疗法防治原发性骨质疏松的效果受ApoE基因多态性的影响，其中ε4型人群通过运动疗法防治骨质疏松的效果较好。 相似文献