| 抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 董海辉,邱玉华,陈永井,胡静平,黄光镁,朱江.抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达[J].科技通报,2010,26(3):367-373. |
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| 作者姓名： | 董海辉 邱玉华 陈永井 胡静平 黄光镁 朱江 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院,苏州,215123
2. 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院,苏州,215123;苏州大学,医学生物技术研究所,苏州,215007 |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项课题，江苏省自然科学基金，江苏省高校高新技术发展基金 |
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| 摘 要： | 在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单克隆抗体 单链抗体 原核表达 |
Construction of Anti-B7-2 Single Chain Antibody Genes and Expression of the ScFv in Escherichia coli |
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| DONG Haihuei,QIU Yuhua,CHEN Yongjing,HU Jingping,HUANG Guangmei,ZHU Jiang.Construction of Anti-B7-2 Single Chain Antibody Genes and Expression of the ScFv in Escherichia coli[J].Bulletin of Science and Technology,2010,26(3):367-373. |
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| Authors: | DONG Haihuei QIU Yuhua CHEN Yongjing HU Jingping HUANG Guangmei ZHU Jiang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | B7-2 |
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