| 不同二价阳离子对T-载体生成的影响 |
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| 引用本文： | 杨鹏,陈喜文,陈德富.不同二价阳离子对T-载体生成的影响[J].科技通报,2006,22(2):169-172. |
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| 作者姓名： | 杨鹏 陈喜文 陈德富 |
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| 作者单位： | 南开大学,生命科学学院,生物活性材料教育部重点实验室,天津,300071 |
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| 基金项目： | 教育部留学基金;南开大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 目的载体加dT尾是基于非模板扩增特性而发展起来的,是TA克隆技术的关键步骤之一,但实际应用中加尾率不高,为此对不同二价阳离子对载体加dT尾的影响效果进行比较,以摸索高效加尾条件。方法用限制性内切酶SmaI将质粒pGEM7Zf( )消化成平末端的线性片段,借助二价阳离子和Taq DNA聚合酶的作用在线性片段3-′末端上添加dTTP,随后与Control Insert DNA连接成环状DNA,再转化进E.coli DH5α-FT。根据白色菌落所占比例来评价不同种类和浓度的二价阳离子对T-载体生成的影响。结果不同种类和浓度的二价阳离子加尾效果比较显示,含1 mmol/L Cd2 缓冲体系的加尾效果最佳;Co2 及高浓度的Cd2 容易导致DNA反应体系变得浑浊,甚至出现白色沉淀析出的现象。结论Cd2 最有助于加尾,Mn2 次之,Mg2 最差。
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| 关 键 词： | T-栽体 正交试验 |
| 文章编号： | 1001-7119（2006）02-0169-04 |
| 收稿时间： | 2004-11-06 |
| 修稿时间： | 2004年11月6日 |
Effect of Different Bivalent Ions on T-vector Making |
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| YANG Peng,CHEN Xi-wen,CHEN De-fu.Effect of Different Bivalent Ions on T-vector Making[J].Bulletin of Science and Technology,2006,22(2):169-172. |
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| Authors: | YANG Peng CHEN Xi-wen CHEN De-fu |
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| Institution: | Key laboratory of Bioactive Materials, Ministry of Education, College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cd2 |
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