| Lumican 基因真核表达载体的构建及其对人子宫内膜癌细胞 HEC -1A 增殖的影响 |
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| 引用本文： | 张慧峰,李岽健,杨镇,熊世禄.Lumican 基因真核表达载体的构建及其对人子宫内膜癌细胞 HEC -1A 增殖的影响[J].荆门职业技术学院学报,2013(2):38-41. |
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| 作者姓名： | 张慧峰 李岽健 杨镇 熊世禄 |
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| 作者单位： | 1. 湖北省肿瘤医院妇瘤科,湖北武汉,430079
2. 华中科技大学同济医学院附属同济医院,湖北武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30901430):内源性硫化氢在血吸虫病性门静脉高压症血管病变中的作用 |
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| 摘 要： | 目的：克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法：取人新鲜正常子宫内膜组织，提取总RNA，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增Lumican基因，将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican，用限制性内切酶酶切分析，DNA序列分析鉴定重组质粒；将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot 检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果：重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切，获得8311 bp片段和865 bp插入片段，序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致；荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达；转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调，Lumican蛋白相对上调率为74．62％（P＜0．05）。与对照组细胞比较，转染Lumican 基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21．35％±2．78％。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican，该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力，为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。
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| 关 键 词： | Lumican基因 真核载体 基因转染 子宫内膜癌 |
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