蚕微卫星DNA的体外自我扩增条件初步研究 |
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引用本文: | 罗滟苏.蚕微卫星DNA的体外自我扩增条件初步研究[J].农业教育研究,2004(1):6-12. |
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作者姓名: | 罗滟苏 |
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作者单位: | 西南农业大学农学与生命科学学院,重庆400716 |
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摘 要: | 采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP—PCR)法,初步研究了家蚕、野蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增的条件。结果发现。浓度为100ng/μl的基因组DNA在100℃变性15min后,与等量的同浓度的未变性的DNA混合作为模板。在80m扩增体系中含0.2mM dNTPs、50mM KCl、10mM Tris—HCl(pH9.0)、4mM MgCl2、1.25U Tap plymerase],加入1μl此混合模板,在92℃,1min→55℃,2min→72℃,2min,30→90次循环的扩增条件下,成功地得到了PCR产物。基因组DNA的适宜浓度为1.25ng/μl反应体系;GSP—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段经回收后,在同样条件下,30—60个循环可得到同样大小范围的产物。GSP—PCR产物经6%的变性测序胶电泳,得到典型的梯状带,表明为微卫星DNA。
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关 键 词: | 扩增条件 天蚕 蓖麻蚕 微卫星DNA 基因组DNA 柞蚕 浓度 PCR产物 变性 PCR) |
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