| 猪源溶血性大肠杆菌fedA的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 王洪波.猪源溶血性大肠杆菌fedA的克隆与表达[J].农业教育研究,2004(1):72. |
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| 作者姓名： | 王洪波 |
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| 作者单位： | 西南农业大学蚕学与生物技术学院,重庆荣昌402460 |
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| 摘 要： | 根据Imbereehts等报道的EHEC F18菌毛主要亚单位(fedA)基因序列设计一对引物，以重庆地区仔猪水肿病流行强毒株W96基因组DNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增到约500bp的核酸片段。用常规DNA重组技术将该片段克隆到表达载体pET28b( )的SalI-Hindm位点之间构建重组表达质粒pET28fedA，序列测定结果显示该克隆片段长447bp，同源性分析表明该基因片段与GenBank报道的fedA核苷酸序列有99．4％的同源性，W96株fedA基因三处核苷酸发生变异，其中两个为无义突变，另一个导致Q100R突变。将pET28fedA转入BL21(DE3)中进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测上清存在约20KD的蛋白，6xHis affinity tag IMAC亲和层析显示该蛋白能被亲和纯化，说明是含有组氨酸标签的融合目的蛋白。
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| 关 键 词： | 溶血性大肠杆菌 仔猪水肿病 强毒株 菌毛 位点 蛋白 重庆地区 克隆 诱导表达 片段 |
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