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1.
采用玻璃珠法从高温堆肥样品中进行了微生物总DNA的提取,以细菌16S rRNA基因 V3区通用引物进行了PCR扩增,随后用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对其微生物多样性进行评估.结果表明,玻璃珠法能够快速、有效地获得高质量的堆肥微生物总DNA,所得的DNA分子片段在15kb以上,使用细菌16S rRNA 基因通用引物(27F和1492R)对总DNA进行PCR扩增,获得了近全长的16S rDNA序列(约1.5kb);DGGE分析结果表明,用该方法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,能够进一步应用于群落结构分析.因此,玻璃珠法提取的DNA可以用于堆肥微生物的分子生态学研究及微生物群落结构分析. 相似文献
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肠道菌群结构多样性初筛研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用. 相似文献
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现代分子生物学技术绕过纯培养障碍对未培养的微生物进行广泛研究,其中,全程rRNA分析法和指纹分析法是目前应用于未培养微生物多样性研究的主要分子生物学方法与技术.另外,PCR扩增法、构建宏基因组文库法等方法的建立,给人类认识未培养的微生物提供了一种探知微生物多样性结构和功能基因组的方法. 相似文献
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孙亮先 《泉州师范学院学报》2006,24(2):83-88
基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)是功能基因组学研究中的一项功能强大的工具.对水稻幼苗SAGE文库的构建进行了探索试验,其主要操作步骤为:以磁珠法提取PolyA mRNA用于合成双链cDNA,再经过一系列的酶切、加接头序列、连接、PCR扩增,获得到26-bp的水稻双标签体,再将26-bp Ditag连接成标签链接体,并将其克隆进pZero-1载体中用于测序.DNA测序结果证明获得了水稻的SAGE标签.试验的各个中间步骤的结果均经过PCR验证.yh 相似文献
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人教版高中《生物（选修3）现代生物科技专题》中介绍了用PCR技术扩增目的基因。在实际的教学过程中遇到好几个问题,现讨论如下：
1为何不需要解旋酶？
DNA解旋酶能降低DNA双链解成单链的活化能,在解旋酶的催化作用下,由ATP提供能量,在生物体内的温和条件下就能使DNA的双链解成单链。在没有酶的催化作用下,就必须由外界提供更多的能量才能使DNA分子活化,当在体外加热到90℃～950℃,DNA分子就由常态转化为活跃状态,双链解旋成为单链。所以PCR技术扩增目的基因不需要解旋酶。 相似文献
6.
核酸分子杂交技术是利用DNA变性与复性的原理,在某种理化因素作用下DNA双链分子解链变性后,在DNA复性重新形成双螺旋结构时,把不同的DNA单链分子或者DNA与RNA的混合物放在同一溶液中,只要在DNA或RNA单链分子之间存在一定的碱基互补配对关系,就可以在DNA之间或DNA与RNA之间形成杂化的双链.蛋白质分子杂交是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法. 相似文献
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探究烤鸭储存过程中菌群的变化,为延长其贮存期奠定理论基础．用酚、氯仿、异戊醇法提取烤鸭肉中细菌的基因组DNA,PCR扩增16SRNAV3区,用DGGE电泳技术分析菌群结构的变化情况,然后用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行烤鸭肉菌群结构相似性分析．PCR结果表明,成功扩增了细菌基因组DNA,为230bp;DGGE实验结果表明,DGGE分子指纹图谱上条带存在显著差异;用bionumberics软件分析,发现样本相似度不断变化,表明在储存过程中,烤鸭肉菌群结构发生了变化．该研究为延长烤鸭肉保质期提供理论参考依据． 相似文献
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酸奶在储存过程中菌群结构变化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
张红琳 《南京晓庄学院学报》2010,26(6):44-46
为了探究酸奶储存过程中微生物菌群结构的变化,为其长期贮存奠定理论基础.采用酚/氯仿法抽提细菌基因组DNA,以此作为PCR反应的模板,进行16S rDNA基因有效扩增,并将PCR扩增产物进行DGGE电泳.用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行舌苔菌群结构相似性分析.实验结果表明,采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区片段,为230 bp.DGGE分子指纹图谱结果表明,1、2号酸奶样品高相似性为93%,1-3号与4-7号的相似仅为6%,表明酸奶贮存过程中,菌群结构发生了变化. 相似文献
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刘利 《广西梧州师范高等专科学校学报》2007,23(2):119-121
现代分子生物学技术绕过纯培养障碍对未培养的微生物进行广泛研究，其中，全程rRNA分析法和指纹分析法是目前应用于未培养微生物多样性研究的主要分子生物学方法与技术。另外，PCR扩增法、构建宏基因组文库法等方法的建立，给人类认识未培养的微生物提供了一种探知微生物多样性结构和功能基因组的方法。 相似文献
10.
乳液PCR扩增复杂基因序列的方法建立及普通PCR的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
该研究分析普通PCR的不足,通过较多实验研究初步建立乳液PCR方法,改善PCR实验技术.采用人工合成的乳酸杆菌质粒为模板,不同成分配比条件下的乳液PCR和普通PCR对质粒序列进行扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后对凝胶进行Gelred染色并用GS-800灰度扫描仪成像.进一步分析乳液PCR和普通PCR扩增产物的特异性以及不同成分配比条件下乳液PCR的扩增质量.通过比较两种PCR方法的扩增结果可得,在相同条件下,乳液PCR扩增特异性高于普通PCR扩增,并确定当水相中加入100 g/L BSA,水油体积比在1∶2.5时,破乳水饱和乙醚体积比为1∶1时,水油相在1700 rpm条件下连续混合5 min时扩增效果最好. 相似文献
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建立并优化虎耳草ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨虎耳草种质资源遗传多样性奠定基础.采用正交设计方法和单因子试验,研究TaqDNA聚合酶、dNTP、Mg2+、引物、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响.结果表明:虎耳草ISSR-PCR的最佳反应体系为:在25μL的反应体系中含模板DNA 35ng,Mg2+1.25mmo/lL、dNTP 380μmo/lL、引物1.2μmo/lL、Taq DNA聚合酶1.5U.反应程序为:95℃预变性5min;94℃变性1min,50℃(据不同引物的退火温度)退火70s,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10min,4℃保存.经过11份虎耳草种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于虎耳草种质资源遗传多样性分析及居群鉴别的研究. 相似文献
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都支杜鹃ISSR扩增条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化,并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物,在梯度PCR仪中设置温度梯度,找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明,至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大,相对而言,dNTP浓度和Mg2+浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15 ul PCR反应体系中包括20 ng模板DNA、0.3μM引物、1.5 ul Buffer(Mg2+free),0.5 U Taq酶、1.5 mM MgCl2和0.1 mM dNTP。 相似文献
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根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明：该基因为放线菌来源chs基因．分别在该基因5＇末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoRI酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple—T／chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点（PI）为5．41、分子量为3965道尔顿含有cHs保守功能区的酸性蛋白质．分析表明,该基因与Streptomyceslividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87．70％．测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中． 相似文献
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枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
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影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素 总被引：1，自引：0，他引：1
研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。 相似文献
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藏药“藏茵陈”的位点特异性PCR鉴别 总被引：1，自引：0，他引：1
对与藏药＂藏茵陈＂药材质量、真伪密切相关的药材来源进行鉴别.首先考察、鉴定市售＂藏茵陈＂药材伪品原植物种,通过对这些植物进行分子序列分析,来比较正品原植物与伪品植物的分子序列碱基位点和分子片段的区别,从而筛选出可靠的分子标记来鉴别＂藏茵陈＂原植物川西獐牙菜Swertia mussotiiFranch.的真伪.根据＂藏茵陈＂原植物特异性的分子片段,设计专用于鉴别川西獐牙菜的PCR引物,用该引物在不同条件下扩增正品及伪品＂藏茵陈＂模板DNA,建立只有正品川西獐牙菜具有阳性扩增的PCR鉴别条件.从而建立一种简便、适用的＂藏茵陈＂川西獐牙菜的DNA分子鉴别方法. 相似文献
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本文对目前常用的一些基因克隆方法包括:抑制性差减杂交、差异显示PCR、DNA代表性差 异分析、cDNA微量列阵法(microarray)、外显子捕获法(exon capturation)、序列基因表达测(serial analysis of gene expression,SAGE)和图位克隆(mapbased cloning)等等作了简要的介绍;同时还介绍了从基因片段获得 其全长的3'RACE或5'RACE技术。可供相关研究人员参考。 相似文献
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王志平 《渭南师范学院学报》2012,(10):61-64
荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用. 相似文献