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质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA． 相似文献
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通过两种从大肠杆菌中提取重组质粒pRSETDNA不同方法的比较,寻找提取重组质粒pRSET DNA的切实可行的方法.将含有目的质粒的菌株分别采用SDS碱裂解法和煮沸法进行质粒DNA小量提取,采用DU800核酸蛋白分析仪测定质粒DNA的产量及纯度.结果SDS碱裂解法获得质粒DNA产量为5.61 μg/ml菌液,A260/280=1.95;煮沸法获得质粒DNA产量为4.36μg/ml菌液,A260/280=1.78.与煮沸法相比,SDS碱裂解法获得质粒产量更多,纯度更高,更适合分子生物学常规实验的要求. 相似文献
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碱裂解法是目前最为广泛应用的质粒DNA的提取方法,本人利用0.9%NaC l溶液代替常规方法中的溶液Ⅰ,并缩短了一些步骤的反应时间,既达到了快速、简便提取质粒DNA的目的,又可以满足分子生物学后续实验的要求. 相似文献
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《滨州学院学报》2019,(6):60-65
分别采用试剂盒法、SDS-K法和CTAB法,提取了云斑白条天牛成虫的胸部、足部、触角和腹部四个组织部位的DNA。通过计算OD_(260)/OD_(280)和琼脂糖凝胶电泳检测法,对不同提取方法和不同组织部位提取的DNA质量进行了检测比较。结果表明,试剂盒法提取云斑白条天牛的胸部、足部、触角和腹部四个组织部位的DNA条带清晰,OD_(260)/OD_(280)均在1.80～1.86,DNA质量最高;SDS-K法提取DNA质量次之;CTAB法较差,基本无条带。不同组织部位提取的DNA,胸部质量最高,足部次之,其浓度由高到低顺序依次为,胸部>足部>触角>腹部。因此,提取云斑白条天牛成虫DNA时,建议试剂盒法从胸部提取,但样品量较少且稀缺时,从足部提取。 相似文献
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介绍了以拟南芥PKS5蛋白激酶在大肠杆菌中的克隆及表达实验为蓝本,进行分子生物学实验教学模式改革。实验提取了拟南芥基因组DNA,并以此为模板用PCR法扩增出PKS5蛋白激酶基因,以pGEX-6P-1质粒为载体,构建pGEX重组质粒并将其转入大肠杆菌BL21中,筛选阳性重组子,用IPTG诱导pGEX重组子表达PKS5蛋白,最终通过SDS-PAGE检测得到约73 KDa的GST-PKS5融合蛋白。学生通过完成上述实验过程,有利于将其所学理论知识应用于实验,形成清晰完整的实验思路。 相似文献
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为获取抽提水溞基因组DNA的最适方法,本研究采用酚-氯仿法,CTAB法和试剂盒法3种方法提取水溞基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取的效果.结果表明3种DNA提取方法均获得较好的DNA,其中试剂盒方法提取的DNA最为理想,完全可满足后续分子生物学实验. 相似文献
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以三色堇叶片为材料,分别采用SDS方法和植物基因组DNA提取试剂盒法对三色堇叶片DNA进行提取,采用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的质量浓度和质量.结果表明:采用SDS方法提取的DNA质量浓度高,但纯度低,耗时长;试剂盒法获得的DNA纯度高,且该方法操作方便,耗时短,但费用较高.PCR扩增结果显示两种方法所提取的DNA均能满足基因扩增和分子标记检测的需要. 相似文献
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采取微波-碱水法提取泉州湾产南方碱蓬叶总黄酮（LFSA）,以紫外分光光度法所测定的总黄酮提取率为指标,采用单因素实验与5因素4水平L16（45）正交实验筛选碱水的pH值、微波功率、液料比、微波处理时间4个因素的4个水平的最佳组合．结果表明：碱水的pH值对LFSA提取率有显著影响（P〈0．05）,LFSA微波-碱水法提取的最佳工艺条件为pH13、微波功率600W、液料比70、微波处理时间9min、提取次数1次,在此条件下,总黄酮提取率为4．87％． 相似文献
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为了解决基于半导体制冷原理的恒温实验箱温度控制问题,设计了一种高精度温度控制方案.通过对半导体制冷过程进行建模,实现了基于半导体制冷技术在制冷工作过程量化描述.对恒温实验箱温度内温度变化进行监测与分析,设计了恒温实验箱内温度的高精度控制算法.仿真测试表明,恒温实验箱内12个温度测量点的平均温度波动为1%以内,单点的温度波动为4%. 相似文献
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以豆渣为原料,采用碱处理和酶解处理相结合的方法,研究酶浓度、碱浓度、反应温度和处理时间对膳食纤维提取率的影响,在单因素实验的基础上进行正交优化.结果表明：1∶30料液比加碱3%于75℃处理70min,再用0.40%的胰蛋白酶37℃下作用135min,漂洗至中性烘干,提取率可达30.95%.将提取出的膳食纤维按4%的比例制作高纤维面包,既能减少环境污染,又能开发出新的功能食品. 相似文献
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采用热水法和碱法提取鹿角海萝多糖,并研究其部分理化性质.实验结果表明,热水提取法多糖得率明显高于碱提法,鹿角海萝中的总糖质量分数为40％;热水法提取的多糖中3,6-内醚半乳糖含量明显低于碱提法,而D-半乳糖的含量明显高于碱提法;由于多糖的硫酸基含量较少,鹿角海萝多糖可能不是卡拉胶而是琼胶类. 相似文献
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通过控制化学试剂的酸、碱环境,控制浓度、温度,控制氧化、分解,选择溶剂和选择配制化学试剂的方法,配制出符合化学实验要求的化学试剂。 相似文献
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碱法提取橙皮苷工艺的优化研究 总被引：2，自引：0，他引：2
通过研究设计正交试验,对碱浸酸析法提取柑橘皮中橙皮苷的工艺条件进行优化研究。L1(645)正交试验结果表明,最优提取条件为:在70℃、pH11.5的碱液中浸提2小时,然后调整溶液pH值至4.5,温度60℃,该条件下橙皮苷得率为2.60%。 相似文献
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文章初步探讨了用不同DNA提取方法,对盐土中微生物总DNA的提取效果.实验结果表明,由于盐土中微生物数量较少,溶菌酶-SDS-冻融裂解法、溶菌酶-SDS-蛋白酶K-冻融裂解法均无法提取到盐土中微生物的总DNA;变性剂-SDS-高盐法和试剂盒提取法能获得DNA,但效果不佳;只有用变性剂-SDS-高盐修改法能快速、有效地提取盐土中微生物的基因组DNA. 相似文献
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于健 《实验室研究与探索》2012,31(7):29-31,48
在原有的样品燃烧盒基础上稍加改造,结合其特点再设计制作一套固定装置,相互组合成一套完整的实验测试装置。应用锥形量热仪的变热流辐射功率特点以及与多通道数据采集仪相组合,就可以同时把多支测温热电偶安装在样品燃烧盒的固定装置上,对固体板状材料内部温度分布进行测试。这种简捷、有效测定固体材料温度场分布的实验方法。 相似文献