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利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。 相似文献
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幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论 成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础. 相似文献
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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。 相似文献
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为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律，根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物，经PCR扩增，从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明，该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus，SeMNPV）pif-2的同源物，读码框含1278bp，编码425个氨基酸的蛋白质，推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明，SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋），经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达，SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带，经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。 相似文献
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研究了红水河野生鳙Aristichthys nobilis上游、中游和下游3个群体29个个体的线粒体控制区(D-loop)和细胞色素b(Cyt b)基因序列,通过PCR扩增与测序,分别获得了长度为823bp和1090 bp的D-loop和Cyt b基因片段。分析表明,D-loop序列共定义了15个单倍型,存在17个多态位点,发生转换4次,插入/缺失13次。Cyt b序列共定义了5个单倍型,存在7个多态性位点,发生转换2次,插入/缺失5次。两序列分析结果表明,群体间和群体内遗传距离较小,遗传变异的分子变异等级不显著。上、中、下游均有共享单倍型,3个群体间遗传分化不大。 相似文献
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测定了红豆杉科、三尖杉科、罗汉松科及松科共9属13种植物的matK基因序列,发现3′端的单碱基插入造成mat k基因在这些类群间有较大的长度变异(1488∽1548bp),其它插入或缺失的长度为3、6或9bp(白豆杉中有一个长为27bp的缺失),且绝大多数插入或缺失事件具有系统发育信息。matK基因中,密码子第1、2及3位的变异率较为相近,平均同义替代率约为平均非同义替代率的2倍。以松科2属3种植物为外类群,运用PAUP软件进行的系统发育分析仅得到一棵最简约树(步长为895,CI=0．850,RI=0．876),该简约树的各分支均得到bootstrap分析的极强支持。结果表明：红豆杉科与三尖杉科均为单系群,二者互为姐妹群;白豆杉属与穗花杉属为红豆杉科中两个很自然的属,白豆杉属为红豆杉属的姐妹群,穗花杉属为榧树属的姐妹群。竹柏属与罗汉松属聚为一支,二者间的亲缘关系得到boot-strap分析的100％支持,从分支分类学及遗传距离角度,作者不赞同将竹柏属提升为科。 相似文献
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一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达 总被引：1，自引：0，他引：1
提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。 相似文献
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本文详细报道了滇蜀豹子花的核型，发现居群中存在两种细胞型，即A型和B型。A型参考核型为2n = 24＝2m(2SAT)+2sm+8st(4SAT)+12t(2SAT)，其第3号两条同源染色体长臂均无居间随体：B型参考核型为2n=24＝2m(2SAT)+2sm+8st(2SAT)+12t(3SAT)+0—1b，其第3号一条同源染色体长臂紧靠着丝点处有一大而明显的居间随体，而另一条同源染色体则无，构成明显的3号染色体的结构杂合性。统计表明，居群中二者的比例近似为1A；2B。研究还发现了大量的体细胞染色体结构变异核型，表明滇蜀豹子花核型尚未趋于稳定，还处于强烈分化之中，高频率的体细胞染色体结构变异是其种内分化不可忽视的一种进化要素。 相似文献
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利用同源克隆的方法,从商陆中克隆得到扩展蛋白基因的全长cDNA序列,命名为PaEXP1(GenBank 登录号为GQ851947).PaEXP1长1128bp,含有759bp的完整开放阅读框,编码252个氨基酸,分子量27.1kD,等电点8.55.PaEXP1氨基酸序列N端含有8个半胱氨酸残基,1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)域,C末端存在4个保守的色氨酸残基,具有扩展蛋白的典型结构.系统进化树分析表明,PaEXP1属于扩展蛋白的α-扩展蛋白家族.Real time-PCR结果表明,PaEXP1主要在根中表达,低温、盐、重金属和渗透胁迫均强烈地抑制其基因的表达.酵母转化实验表明,转PaEXP1可以提高酵母的平均直径,说明PaEXP1参与细胞壁的松弛扩展和细胞的增大过程. 相似文献
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根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物，应用RT-PCR技术，从脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession，AY628648）。扩增片段全长591bp，共编码197个氨基酸的前体蛋白，其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失，分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达，获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达，并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。 相似文献
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酯酶被应用在很多方面,但是能够满足工业需要的天然酯酶却很少。利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因estA。基因estA含有一段1272 bp的ORF,序列分析发现与Anaerophaga thermohalophila的酯酶家族基因同源性为60%。利用表达菌株E.coli BL21(DE3),pGEX-6p-1质粒构建表达载体,并对其进行蛋白表达并纯化回收得到EstA,以便后续酶学性质及应用价值探究。 相似文献
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从拟南芥中克隆得到AtACO3基因的全长cDNA序列.半定量PCR实验结果表明,200 μmol/L CuCl2处理能明显抑制该基因的表达,而200 μmol/L ZnCl2处理1h则可显著促进其表达.为验证AtACO3蛋白N端的功能,构建AtACO3 5端1632 bp基因片段的原核表达载体pET30a-AtACO3-N,并转化大肠杆菌.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,该基因片段可以在大肠杆菌中稳定表达.进一步的抗性实验表明,异源表达基因AtACO3的N端序列能提高大肠杆菌的Zn2+耐受性. 相似文献
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人类两种单基因性状或疾病的遗传现象是普遍存在的,在预期它们的传递规律时,重要的是要考虑控制它们的基因是否位于一对同源染色体上。如果位于不同对的染色体即非同源染色体上,则遵循自由组合定律传递;如果位于一对同源染色体上,则遵循连锁与互换定律传递。 相似文献
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基因的分离定律、基因的自由组合定律是高中生物学中较难的部分,对其准确的、全面的理解是学好遗传的关键。等位基因的分离、非等位基因的自由组合与减数分裂过程中同源染色体分离、非同源染色体的自由组合密切相关。利用凸显重要概念和绘制细胞简图的方法来配合基因的分离定律和基因的自由组合定律在减数分裂过程的理解,创造性地达成了复习课的效果。 相似文献
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RNA干扰技术发展历史很短,给我国带来了难得的机遇,我国业界应抓住这次机遇,加快新药研究与开发的步伐RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是由内源性或外源性短链RNA诱导同源mRNA降解,导致基因沉默的现象。RNAi被认为是目前国际上最具潜力的一种基因治疗方法。从理论上讲,几乎所有 相似文献