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1.
地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因的克隆及其表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以噬菌体λEMBL3为载体,大肠杆菌Q358,Q359为宿主构建了地衣芽胞杆菌的基因文库,用I_2-KI染色法从该文库中分离出α-淀粉酶基因,并将含该基因的2.5kb片段亚克隆至pBR322。限制图谱分析显示克隆的基因与国外克隆的地衣芽胞杆菌基因有所不同。将2.5kb的基因片段与质粒pUB18的BamHI片段连接、组建重组质粒pUA44,并将其转入枯草杆菌的感受态细胞及短小芽胞杆菌的原生质体,实验结果证明,克隆基因可在枯草杆菌及短小芽胞杆菌中表达。 相似文献
2.
李弘华 《孝感职业技术学院学报》2003,6(3):71-73
利用设计合成的特异性引物，通过PCR扩增获得乙肝病毒的S区621个bpDNA片段．该扩增产物经EcoRI与BamHI双酶切后直接克隆进入PSK载体进行表达，再通过扩增重组菌株，以获得大量的S区DNA片段，对它们进行光敏生物素标记，制成探针，对乙肝病毒进行检测灵敏度高，特异性强，其灵敏度可达到4pg水平。 相似文献
3.
以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系．首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoRⅠ酶切位点双链的人工接头,通过EcoRⅠ对其进行酶切．再与经过EcoRⅠ酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置人到感受态大肠杆菌细胞中（即转化）,并让这种细胞在含有Amp＋／IPTG／X—Gal的LB培养基上生长．挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆． 相似文献
4.
以质粒pSC101为载体,用鸟枪法将短小芽孢杆菌A3染色体的β—内酰胺酶基因,克隆至大肠杆菌HB101。经质粒检测及酶切电泳分析证明,克隆的β—内酰胺酶基因位于2.6kb的EcoRI片段上,将此片段连接到质粒PAL32转化枯草杆菌,亦能表达并向胞外分泌β—内酰胺酶。 相似文献
5.
6.
苦瓜作为药食同源的植物,含有许多活性成分,其中核糖体失活蛋白MAP30是近年来研究较多的一种.根据G enbank中MAP30序列,采用PCR技术,从苦瓜基因组DNA中扩增出该基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a上,构建重组质粒pET-MAP30,经克隆载体转化菌液PCR鉴定,结果显示成功构建MAP30的原核表达载体. 相似文献
7.
从人直肠癌细胞株Colo320中提取总RNA,经RT-PCR扩增出SOD基因片段,经限制性内切酶（BamHI,Sinai）酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了人SOD基因融合表达载体．转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有与预期大小约44kD相吻合的融合蛋白带,获得了可溶性表达的目的蛋白,采用Glutathione Sepha—rose4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了纯度很高的目的蛋白． 相似文献
8.
目的构建L-ficolin突变体的原核表达载体，为研究L-ficolin的糖结合位点奠定基础。方法设计L-ficolin突变体基因上、下游引物，分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点。以插入L—ficolin M2（Val144Phe）和M6（Glu 307Asp）点突变的完整编码区基因的质粒pCDNA3-L-ficolin为模板，通过PCR扩增获得突变体的基因片段，将其克隆入原核表达载体pGEX—KG．然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定；将此表达载体转化入表达菌BL21（DE3）pLvSs诱导表达。并采用SDS—PAGE对表达产物进行鉴定。结果经酶切及序列分析表明．成功地构建了重组原核表达载体pGEX-KG—L—ficolin—M2、pGEX-KG-L-ficolin—M6，SDS—PAGE显示目的蛋白大量表达。结论L—ficolin突变体融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达。为研究L-ficolin的糖结合位点打下基础。 相似文献
9.
目的:构建唾液抗菌肽P113基因多拷贝串联重组体,并将其克隆到表达载体pET-28a.方法:根据大肠杆菌偏爱的密码子设计并合成人唾液抗菌肽P113基因,采用PCR技术构建P113基因的自融合多拷贝串联重组体polyP113,BAMH I和HindⅢ双酶切表达载体pET-28a和polyP113基因,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性菌落,PCR、酶切、测序鉴定重组质粒.结果:所构建的含有十拷贝P113基因的重组体正确克隆到表达载体pET-28a上,无突变.结论:成功构建含十拷贝唾液抗菌肽P113基因表达框的大肠杆菌表达载体. 相似文献
10.
目的:探测细胞氧化低密度脂蛋白(LDL)过程中人α-防御素-1(HNP-1)基因的表达水平并构建人HNP-1的克隆载体。方法:提取人单核细胞系(THP-1)的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得cDNA,采用pBS-T克隆HNP-1。结果:用RT-PCR在THP-1细胞总RNA中扩增出一条285 bp的DNA片段,与HNP-1 cD-NA片段大小一致。重组质粒经PCR和测序鉴定获HNP-1基因克隆。另外,LDL可诱导THP-1细胞HNP-1的mR-NA表达增加。结论:HNP-1可能参与LDL的细胞氧化过程,成功构建HNP-1克隆载体将为进一步亚克隆到原核及真核的表达载体提供了基础。 相似文献
11.
本实验考察了基因工程茵Ecoli TOP10F’重组质粒pBAD／gⅢA—NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100％,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88％。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。 相似文献
12.
13.
张桃生 《闽西职业技术学院学报》2005,7(2):27-31
诚信是一个人的立身之本,也是处理人际关系的重要德行。一个缺乏诚信的注册会计师,很难做到依法办事、客观公正。建立健全会计工作的信用,培养注册会计师的诚信品德事关注册会计师行业和社会主义市场经济能否顺利健康地发展。诚信建设已成为当前注册会计师行业的工作主线,有必要对当前存在的注册会计师失信原因及其危害性以及加强注册会计师诚信建设的对策进行深入的研究和探讨。 相似文献
14.
基于词项逻辑的逻辑常项即词项联结词A、E、I、O的逻辑性质如对称性、周延性(范围和方向),可以建立三段论的新方法———替换中项法,来同时解决三段论的判定问题、直接的推理或者直接的证明问题,最后形成包括24个经典有效式的非经典三段论体系。经典三段论的规则立足于直言命题的四个组成要素:主项,谓项,量项和联项来判定三段论的有效性是不恰当的。 相似文献
15.
基于基因工程技术 ,用PCR法扩增出编码ICA6 9的cDNA片段 ,直接克隆到pSPORT 1质粒上 ,经DNA序列测定 ,插入到GST融合蛋白表达载体 pGEX 2T ,构成重组质粒 p2T ICA6 9,得到的表达产物GST ICA6 9融合蛋白用间接ELISA法检测其免疫原性 .测序结果表明 ,所获PCR产物已正确重组到PGEX 2T表达型质粒中 .重组质粒在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性 ,并能应用于Ⅰ型糖尿病病人血清中抗ICA6 9抗体的检测 .所获得的表达产物为重组ICA6 9融合抗原 ,有助于提高Ⅰ型糖尿病的预报率和确诊率 . 相似文献
16.
《Critical Studies in Education》2013,54(1):47-61
While the need for humanising education is pressing in neoliberal societies, the conditions for its possibility in formal institutions have become particularly cramped. A constellation of factors – the strength of neoliberal ideologies, the corporatisation of universities, the conflation of human freedom with consumer satisfaction and a wider crisis of hope in the possibility or desirability of social change – make it difficult to apply classical theories of subject-transformation to new work in critical pedagogy. In particular, the growth of interest in pedagogies of comfort (as illustrated in certain forms of ‘therapeutic’ education and concerns about student ‘satisfaction’ in universities) and resistance to critical pedagogies suggest that subjectivty has become a primary site of political struggle in education. However, it can no longer be assumed that educators can (or should) liberate students' repressed desires for humanisation by politicising curricula, pedagogy or institutions. Rather, we must work to understand the new meanings and affective conditions of critical subjectivity itself. Bringing critical theories of subject transformation together with new work on ‘pedagogies of discomfort’, I suggest we can create new ways of opening up possibilities for critical education that respond to neoliberal subjectivities without corresponding to or affirming them. 相似文献
17.
Molecular cloning and nucleotides sequence analysis of G1 genome segment of hantaan virus Z10 strain
Liang Wei-feng Shen Yue-hong Ma Yi-lin Zhao Nian-feng Chen Ya-gang Zhu Zhi-yong Xu Xiao 《浙江大学学报(A卷英文版)》2000,1(2):207-211
The molecular cloning of the G1 genome segment of the Z10 strain of Hantaan virus and analysis of the first gene data on the currently widely used Hantavirus vaccine strain in China
are presented. The G1 genome segment of Z10 virus was amplified by the method of RT-PCR, and the products were cloned into the pGEM-T vector after identification and
purification. The clone was sequenced by Sanger’s dideoxy chain termination method. The 1449 bases of the Z10 G1 genome segment, and the coding for 483 amino acids were determined. The base compositions for the G1 segment RNA determined from cDNA sequence information, were 20.6% A, 21.6% G, 18.8% C and 30.0% U. These values are similar
to those of the 76/118, Lee and SR virus. As compared to the Z10 G1 segment, the sequence homology at the nucleotide level is 87% (76/118, type I), 86% (Lee, type I), 86% (Hojo, type I), 67%
(R22, type II), and 59% (K22, type III). The Z10 virus G1 protein amino acid sequence identity with other Hantaan viruses (94–95% homology) was higher than that with Seoul type viruses
(77–80%). More amino acid sequence heterogeneity between the Z10 and 76/118 was observed in the N terminal, especially the diverging cluster of ten amino acids at position 84 to 93 of the
Z10 virus G1 protein. Conclusion: (1) The Z10 strain is one of the Hantaan viruses. (2) The important region of the Z10 G1 segment was conservative. (3) Although substantial divergence of nucleotide sequences of the G1 genome segment was found between the Z10 strain and other type I Hantaviruses, relatively high amino acid sequence homology was shown among them. Thus, good immune
protection could be obtained with the inactivated Meriones unguiculatus kidney cell vaccine against other strains of Hantaviruses. 相似文献
18.
Study on pig growth hormone gene polymorphisms in western meat-type breeds and Chinese local breeds 总被引：1，自引：0，他引：1
INTRODUCTIONGrowthhormone (GH)isapeptidehormonewhichregulatesgrowthandvariousmetabolicac tivities (Sterle,1 995;Yuan ,1 996) .InjectionsofGHintogrowingpigsincreasedgrowthrateoftheanimalsandthepercentageofmuscle ,andwhilefataccretionwasdecreased (Bonneau ,… 相似文献
19.
体育拓展运动的内容与分类 总被引：19，自引：0，他引：19
拓展运动是一种现代人和现代组织全新的学习方法和训练方式,是一种全新的体育课内容,把原有的仅限于学校体育课堂的、竞技性很强的跑、跳、投、攀爬、跨越等基本内容,扩展到社会和大自然中,将体育活动与社会、自然、环境融合在一起.但我国目前关于体育拓展运动的相关理论还处于一个十分初浅的阶段,特别是把体育拓展运动作为理论来进行系统研究的国内还十分罕见.所以本文就拓展运动的渊源,内容与分类,作为一个系统的阐述. 相似文献
20.
王玉萍 《天津成人高等学校联合学报》2014,(8):109-113
教学环境对于学生的学业成就和智力发展有着至关重要的影响。教学环境可分为教育环境与学习环境。本文将从教育心理学针对教学环境的新进展入手,探讨教育环境、教学环境对学生学业成就、学业自我概念的影响,以针对课堂情感氛围和Marsh的I＼E模型与大鱼小池效应的组合模型为重点,探讨其对于教与学的启示。 相似文献