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1.
目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。 相似文献
2.
目的：探讨SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法的可行性.方法：分离并消化大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,采用胶原酶消化组织块方法,并进行免疫组化鉴定.结果：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,易体外贴壁,经消化酶消化后,24h内贴壁的细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达较其它时段贴壁的细胞高.结论：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原代培养可行,对研究ED病治疗机制有重要意义. 相似文献
3.
人心房成纤维细胞体外组织块贴壁培养与鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
从建立体外循环将进行心脏手术的风湿性心脏病患者体内无菌下取心脏停跳前右心耳组织,采用组织块贴壁法进行心房成纤维细胞的分离培养,通过光学显微镜观察培养后的细胞形态,并通过免疫细胞化学的方法鉴定所分离培养的细胞。贴壁4—6d后可见长梭形贴壁生长的细胞游离出组织块,细胞生长迅速,2—3d后即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,胞体较大,细胞浆透明,细胞核较大,呈椭圆形,无自发性搏动。免疫细胞化学检测显示所培养细胞波形蛋白呈阳性反应。通过组织块贴壁法顺利分离人心房成纤维细胞。 相似文献
4.
目的：从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞．观察其生长、增殖及分化．方法：采取无血清培养和单细胞克隆技术．采用原代贴壁及传代悬浮方法．培养获得细胞克隆．利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞．结果：从新生SD大鼠脑室下区分离的组织，经原代和传代培养均可形成细胞克隆．且具有增殖能力．原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase．NSE)抗原呈阳性．神经干细胞可分化为神经元．结论：用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力．属于中枢神经系统的干细胞． 相似文献
5.
目的体外分离胰腺干细胞,选择最佳培养条件探索胰腺干细胞在体外环境下向β细胞的分化情况.方法取SD大鼠胰腺组织,胶原酶消化,密度梯度离心获得纯化的胰腺导管上皮细胞.采用分步诱导法诱导胰腺导管上皮细胞向胰岛β细胞分化;用胰岛素释放实验检测胰岛功能,免疫荧光法检测nestin,PDX-1,CK-19,CK-20胰岛素及胰高血糖素等的表达.结果胰腺消化培养6～12h,可看到胰腺导管上皮细胞贴壁生长,通过4步诱导培养,nestin阳性细胞快速生长,并可分泌胰岛素.结论体外分离的成人胰岛前体细胞,在诱导因子的作用下,胰腺干细胞可定向分化为β细胞,有望应用于糖尿病的治疗. 相似文献
6.
目的:本试验旨在探究猪耳皮肤组织块在4℃冷藏条件下保存后,考察其成纤维细胞的细胞活力、细胞周期及细胞骨架等特性变化。方法:采集猪耳皮肤组织,分别冷藏保存2、4、7d后,进行成纤维细胞分离培养,同时设立新鲜组织块对照组,观察组织块原代细胞培养开始贴壁以及80%汇合的时间,再传至第3代,MTT检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞周期,免疫荧光染色检测细胞骨架的变化。结果:与对照组相比,各保存组成纤维细胞经组织原代培养后开始贴壁和80%汇合时间滞后,细胞形态都良好;保存7d的细胞活力与对照组相比显著性降低;保存4d和7d的G0/G1期细胞显著性增加,保存7d的S期细胞显著性降低;各组细胞具有良好的骨架系统,各给药组微管蛋白的荧光强度与对照组也无显著差异。结论:猪耳缘组织块在4℃保存后,经原代培养和继代培养,可获得具有正常增殖活力和细胞特性的成纤维细胞。 相似文献
7.
比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度（98.4%）明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型. 相似文献
8.
大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:探讨成体大鼠的间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养,为其应用提供理论依据.方法:用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,对分离的细胞进行碱性磷酸酶的检测.结果:取得较高纯度的成体大鼠骨髓MSCs,并保持细胞的活性;成体大鼠骨髓MSCs在体外培养中为贴壁生长的单个核球形细胞,培养3～4d后开始大量增殖,并形成形态均一的细胞增殖集群,对分离后所获得的细胞进行AKP染色为强阳性.结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的MSCs,是实用、便捷和可行的方法.并且在体外培养条件下能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,可以成为进一步进行细胞扩增或其他实际应用的基础. 相似文献
9.
兔骨膜成骨细胞的分离培养 总被引：2，自引：0，他引：2
采用植块法和分批消化法相结合的方法分离得到了兔骨膜成骨细胞,鉴定后进一步研究了其生长特性。结果表明:该法可以在短时间内得到足够数量的细胞且纯度较高(8d达1.8 × 105个／ml),其最终碱性磷酸酶(ALP)分泌量为(13.12±0.18)IU／ml,骨钙素(BGP)量约为(20±0.3)ng／ml。 相似文献
10.
目的:探讨胚胎神经干细胞的分离、培养和鉴定方法.方法:原代培养、培养细胞生长状况观察、组织化学鉴定、流式细胞仪进行细胞凋亡分析.结果:准确分离出了神经干细胞,了解其生长规律及细胞凋亡的情况.结论:用此方法分离胚胎神经干细胞实用、便捷和可行. 相似文献
11.
DNA分子体外重组技术是基因工程的核心技术之一。国内许多高校在开设这一技术的实验教学中都采用了TA克隆法这一比较落后的实验方法。为了使学生更好地掌握DNA分子体外重组技术,增强技术的实用性,有必要在实验教学内容上作出调整。姊妹PCR克隆法和平末端克隆法是2种简单、经济、重复性好的克隆方法,其中姊妹PCR克隆法不需对目的基因进行酶切处理,即能得到具有各种黏性末端的DNA分子,可直接定向克隆到经相应内切酶消化的载体中。这2种方法不仅能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中各类载体的构建。 相似文献
12.
Dan Li Shi-yun Peng Zhen-wu Zhang Rui-cheng Feng Lu Li Jie Liang Sheng Tai Chun-bo Teng 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2013,14(7):596-603
The in vitro isolation and analysis of pancreatic stem/progenitor cells are necessary for understanding their properties and function; however, the preparation of high-quality single-cell suspensions from adult pancreas is prerequisite. In this study, we applied a cold trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) digestion method to disassociate adult mouse pancreata into single cells. The yield of single cells and the viability of the harvested cells were much higher than those obtained via the two commonly used warm digestion methods. Flow cytometric analysis showed that the ratio of ductal or BCRP1-positive cells in cell suspensions prepared through cold digestion was consistent with that found in vivo. Cell culture tests showed that pancreatic epithelial cells prepared by cold digestion maintained proliferative capacity comparable to those derived from warm collagenase digestion. These results indicate that cold trypsin-EDTA digestion can effectively disassociate an adult mouse pancreas into viable single cells with minimal cell loss, and can be used for the isolation and analysis of pancreatic stem/progenitor cells. 相似文献
13.
不同消化方式对FASS测定豆豉中金属元素含量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
以自制豆豉为原料,比较不同前处理方法对豆豉中Mn、Cu、Fe金属元素测定结果的影响。利用干法灼烧灰化、常规湿法消解和微波消解处理样品,用原子吸收光谱法测定样品中Mn、Cu、Fe的含量。3种消解方法处理的样品中Fe的含量较高,其次是Mn,再次是Cu。试验结果表明,三种消化方式都适合处理豆豉样品,其中又以微波消解最好。 相似文献
14.
《Learning and individual differences》1998,10(2):121-136
Two longitudinal statistical methods are illustrated and compared. The first method, Tuckerized growth curve analysis (TGCA), is an extension of factor analysis, while the second method is an extension of K means analysis (KMA), a clustering technique. Both techniques make few assumptions of data and are useful for examining growth or change in longitudinal data. The two statistical methods are described and illustrated with group counseling data. The relative strengths and weaknesses of each technique are discussed. 相似文献
15.
通过干灰化法、Mars高通量密闭微波消解、压力自控密闭微波消解等三种前处理方法对同一种食品包装纸进行了总砷的检测,并对检测结果进行分析比较。实验结果表明干灰化法、高通量密闭微波消解法、压力自控密闭微波消解法的检出限分别为0.28ng/mL、0.09ng/mL、0.09ng/mL,精密度分别为9.97%、3.20%、4.15%,加标回收率分别为89.4%、93.7%、97.3%。经过相关比较分析,总结出前处理方法对纸制品中总砷检测的影响。 相似文献
16.
Ray Paton 《Teaching Statistics》1991,13(1):5-8
A biotechnological method for cell and enzyme immobilisation is outlined and the need for statistical thinking associated with experimental outcomes is discussed. A solution to the statistical issue of comparing sets of data is proposed based on analysis of ranks. The use of the box-and-whisker technique is advocated. 相似文献
17.
量化技术环节运动参数,优化教学计划和方案,同类项目技术归类,异类项目技能迁移,结合运动技能形成机制,在传统教学法的基础上对排球基本技术进行了项群归类的教学实验。结果表明：项群归类教学法与传统教学法的有机结合,有利于缩短教学周期,提高教学效果。 相似文献
18.
土壤重金属测定中不同消解方法的对比研究 总被引：2，自引：0，他引：2
分别用电热板法、密闭容器法和干灰化法对土壤样品进行预处理,然后用原子吸收分光光度法测定其中Cu、Zn、Pb、Cd、Cr的含量,检测结果表明,密闭容器消解法效果优于其他两种,具有消解完全、挥发损失少、污染少和结果准确等优点. 相似文献
19.
不同消解方式对火焰原子吸收光谱法测定婴儿配方奶粉中Fe含量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
分别用微波消解法和湿式消解法处理婴儿配方奶粉样品,用火焰原子吸收光谱法测定其中的添加元素铁的含量。研究结果表明：不同消解方法对测定结果有影响,与湿式消解火焰原子吸收光谱法相比,微波消解火焰原子吸收光谱法测定婴儿配方奶粉中铁元素含量具有更高的精密度和准确度。 相似文献