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1.
以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1a C端氨基酸331到氨基酸486（简称△HsfA1a）的大肠杆菌Ecoli M15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IVFG）诱导表达△HsfA1a,再通过Ni—NTA—Agarose亲和层析纯化表达的△HsfA1a,通过SDS—PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的△HsfA1a． 相似文献
2.
为探究热激对拟南芥热激因子AtHsfA1a表达的影响,对过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的植株进行39℃热激5 min后提取其RNA,应用RT-PCR技术对热激因子AtHsfA1a的RNA进行逆转录和扩增,并对其进行电泳检测.结果表明：过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在热激和常温下表达量均比野生型高;而且野生型拟南芥和过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在39℃热激下的表达量比25℃常温下的高,说明AtHsfA1a的表达受热激诱导,结果可为研究拟南芥热激因子AtHsfA1a作用机理提供科学依据. 相似文献
3.
孙晓东 《陕西教育学院学报》2010,26(2):106-107,121
为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E．coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E．coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E．coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。 相似文献
4.
在已有的pET30a/hs表达载体的基础上，构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后，转化入表达宿主大肠杆菌M15，IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35％)；表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2 亲和层析胶(Ni^2 —IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白，经SDS—PAGE鉴定为单一条带。 相似文献
5.
以过量表达 AtHsfAla 及 AtHsfAla 基因沉默的转基因植株为材料,通过控制土壤水分进行干旱处理,结果显示,过量表达型干旱处理后的存活率最大,而基因沉默型最小,表明 AtHsfA1a 能增强植物的抗旱性。为了从生理水平研究 AtHsfA1a 提高抗旱性的机制,研究发现过量表达型的叶片相对含水量和叶绿素含量最高,而沉默型最低。不同基因型植株的 H2 O2和 MDA 的含量正好相反,说明 AtHsfA1a 通过保护细胞膜而减小细胞所受氧化伤害来提高抗旱能力。 相似文献
6.
以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系．首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoRⅠ酶切位点双链的人工接头,通过EcoRⅠ对其进行酶切．再与经过EcoRⅠ酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置人到感受态大肠杆菌细胞中（即转化）,并让这种细胞在含有Amp＋／IPTG／X—Gal的LB培养基上生长．挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆． 相似文献
7.
介绍了以拟南芥PKS5蛋白激酶在大肠杆菌中的克隆及表达实验为蓝本,进行分子生物学实验教学模式改革。实验提取了拟南芥基因组DNA,并以此为模板用PCR法扩增出PKS5蛋白激酶基因,以pGEX-6P-1质粒为载体,构建pGEX重组质粒并将其转入大肠杆菌BL21中,筛选阳性重组子,用IPTG诱导pGEX重组子表达PKS5蛋白,最终通过SDS-PAGE检测得到约73 KDa的GST-PKS5融合蛋白。学生通过完成上述实验过程,有利于将其所学理论知识应用于实验,形成清晰完整的实验思路。 相似文献
8.
高温条件下,生物体普遍的反应是产生热激蛋白。转录水平的调控是热激蛋白基因表达调控的主要方式。热激转录因子通过与热激基因上游调控片段中的热激元件结合来调节热激基因的转录。本文简要介绍了植物热激转录因子的种类、结构、功能及转录调节机制等方面的研究。 相似文献
9.
从假单胞菌（Pseudomonassp．）XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础．以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框（0RF）克隆至融合表达载体pET30a（＋）进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析．实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E．coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92％以上．表达蛋白具有良好活性． 相似文献
10.
重组人B淋巴细胞刺激因子原核表达初探 总被引：1，自引：0，他引：1
借助SDS－PAGE分析方法，以重组人B淋巴细胞刺激因子（rhBLyS）蛋白表达宿主菌株M15（pQE30a/rhBLyS）作为研究对象，对于用IPTG诱导的重组目的的产物的表达进行了优化研究，分析比较了诱导时间、IPTG浓度、温度等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明，降低温度和IPTG浓度有利于增加靶蛋白的可溶性，27℃和0．075mmol/L为比较适合的表达条件。 相似文献
11.
杨平 《南京晓庄学院学报》2011,27(3):72-75
该研究分析了拟南芥9个β-淀粉酶家族基因（BAM1―BAM9）在cDNA和蛋白质上的同源性,分析了每个基因反映密码子使用特性的参数：GC含量、同义密码子第1～3位置中的GC含量、有效密码子数等.结果表明,拟南芥β-淀粉酶家族基因在密码子的使用特性上不存在的偏好性.Spss分析表明,ENc与GC3s%和GC%呈显著正相关（P〈0.05）.拟南芥β-淀粉酶家族基因序列间的同源性差异较大,在cDNA和蛋白质序列上的基因同源性分别为41.6%～64.2%和29.4%～62.6%,其中,BAM5和BAM6间的同源性最高. 相似文献
12.
用35～65℃恒温水浴对津春5号、新白玉、津研4号3个品种的黄瓜种子进行热击处理15-40min,结果表明45℃,20min处理津研4号种子的萌芽率明显升高,达到95％,平均株高和健壮度均较好;而45℃,30min处理津春5号与新白玉种子的效果较好．浸泡（8h）加热击（20min,45℃）依次处理以上3个品种的黄瓜种子,其萌芽率分别达到68．3%,74．7％和97．7％．表明适当温度和时间的热处理可以提高黄瓜种子的萌芽率． 相似文献
13.
用热变性法或磷酸缓冲液法从拟南芥植物中粗提取超氧化物歧化酶（SOD）,再用丙酮法或硫酸铵分级盐析法纯化SOD．比较发现,热变性法粗提取的SOD回收率较高,而2种纯化方法的差异却无统计学意义;同时,还比较了用同一种方法所提取的拟南芥和大蒜之间的SOD活性,大蒜的SOD活性高于拟南芥． 相似文献
14.
将含有TaLEA1基因的表达载体pBI121-TaLEA1经根癌农杆菌介导,利用花粉管通道法转入拟南芥,得T0代种子,抗Kan筛选得转基因植株.经PCR检测,初步证明外源TaLEA1基因已整合到拟南芥基因组中. 相似文献
15.
史蕾 《广东教育学院学报》2011,(3):66-71
首先合成二吡咯烷烃,分离纯化后再和不同的醛反应,合成了5种周边被F（2a）,Cl（2b）,Br（2c）,I（2d）及H（2e）原子取代的Corrole化合物,分离收率介于8.1%～26.4%.通过紫外-可见吸收光谱,稳态荧光光谱,流体力学实验及CD光谱推断所合成的5种化合物和小牛胸腺DNA（CT DNA）的结合模式为外部结合.此外,卤素重原子对于化合物和CT DNA的结合模式没有显著影响. 相似文献