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质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA． 相似文献
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利用微生物防治环境污染具有成本低、效率高、二次污染小等优点，在当前环境保护中有着重要的作用。降解菌的获得通常有两种方式：一是传统的筛选，它主要是利用富集技术，即将土壤或污水、污泥直接接种于特定培养基中，经数次转接后分离出降解菌株；二是利用现代生物技术改造菌株。在自然界中本身就存在着一些降解性细菌能将一些有机物降解掉，充当了大自然的“清道夫”。对降解菌株的分离研究，自从1972年美国学者Chakrabarty发现降解水杨酸盐的SAL质粒以来，相继发现的细菌对许多污染物的降解都是由质粒控制的，不同的“多质粒超级细菌”在环境工程中也相继应用。因此，在向学生进行环境保护和防治的教育中，增添一些与此有关的趣味性探究实验，对于激发学生的学习兴趣和增强环保意识很有必要。 相似文献
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本文综述了近年来细菌降解蒽醌染料的研究进展及机理,以期为蒽醌染料废水的实际处理提供理论依据。目前主要利用物理、化学及生物法处理工业印染废水中的各种染料。与前两者相比,生物法具有经济且环保的特点。本文以蒽醌染料的分类及结构为基础,总结近年来已报道的蒽醌染料高效降解细菌的多样性;初步探讨细菌吸附、降解蒽醌染料的机理与主要影响因素;根据目前的研究进展及存在问题,提出细菌降解蒽醌染料的研究方向。 相似文献
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为了克隆多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的DHA-1型β-内酰胺酶并探测其序列的结构特征,抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切粘末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-TEasy载体进行T-A克隆.在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序.通过以上方法,克隆筛选到含5.2kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个DHA-1基因和一个ampR基因,依次在DHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26.因此,可以认为成功克隆了质粒介导的DHA-1基因,并在其相邻序列中存在插入序列IS26. 相似文献
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研究目的：评价毒死蜱施用后对土壤细菌和真菌群落结构的影响,并对降解功能菌株进行分析。创新要点：通过聚合酶链式反应–变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）方法,揭示了毒死蜱施用后土壤细菌和真菌群落结构动态变化,并对试验土壤中的降解菌群进行分子鉴定。研究方法：将农田土壤用终质量分数5 mg/kg和20 mg/kg毒死蜱处理,同时以不施用毒死蜱为对照,定期采集土样进行毒死蜱残留测定并提取土壤DNA。将提取的土壤总DNA作为PCR反应模板,细菌群落结构分析采用对大多数细菌16S rRNA基因V3区具有特异性的引物GC-341F和517R,真菌群落结构分析采用ITS区特异引物对GC-ITS1f和ITS2f。DGGE图谱经Quantity One软件进行数字化分析,各泳道中的条带经标准化处理之后,条带的相对光密度构成一个矩阵,用Matlab软件进行主成分分析（PCA）,用Dice法计算相似性指数CS,用MEGA 4.1软件构建系统发育树,进行聚类分析。之后,采用LB、察氏和高氏三种培养基结合的纯培养分离方法,从毒死蜱处理土样中分离具有降解功能的菌株。分别提取纯培养物的染色体DNA,利用ERIC-PCR对分离到的降解菌进行基因组指纹图谱分析,将典型肠杆菌基因间的重复共有序列–聚合酶链式反应（ERIC-PCR）指纹图谱类型的代表菌株进行16S rRNA基因（细菌和放线菌）或ITS区（真菌）扩增并测序,测序结果提交GenBank基因库,并进行BLAST比对,初步确定降解菌株的分子地位。重要结论：本实验条件下,毒死蜱降解符合一级动力学,5 mg/kg和20 mg/kg毒死蜱浓度下的降解方程分别为y=5.252e-0.09x和y=19.41e-0.08x。DGGE指纹图谱显示,毒死蜱施用后土壤真菌群落结构与对照相比发生很大改变,且毒死蜱处理样品真菌群落结构保持基本稳定,多样性指数明显提高（见图2b）;主成分分析显示,毒死蜱处理样品与对照明显分在2个不同的区域,充分表明毒死蜱对土壤真菌群落结构影响迅速且持久（见图3b）。毒死蜱处理样品细菌群落结构只在试验前30天与对照相比明显不同,60天时已经恢复对照水平（见图2a）,同时主成分分析图上,毒死蜱处理样品与对照也越来越靠近,最后聚在一起（见图3a）,说明毒死蜱对土壤细菌群落结构影响短暂。最后,获得了9个典型的ERIC型毒死蜱降解菌株。 相似文献
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研究目的:评价毒死蜱施用后对土壤细菌和真菌群落结构的影响,并对降解功能菌株进行分析。创新要点:通过聚合酶链式反应–变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)方法,揭示了毒死蜱施用后土壤细菌和真菌群落结构动态变化,并对试验土壤中的降解菌群进行分子鉴定。研究方法:将农田土壤用终质量分数5 mg/kg和20 mg/kg毒死蜱处理,同时以不施用毒死蜱为对照,定期采集土样进行毒死蜱残留测定并提取土壤DNA。将提取的土壤总DNA作为PCR反应模板,细菌群落结构分析采用对大多数细菌16S rRNA基因V3区具有特异性的引物GC-341F和517R,真菌群落结构分析采用ITS区特异引物对GC-ITS1f和ITS2f。DGGE图谱经Quantity One软件进行数字化分析,各泳道中的条带经标准化处理之后,条带的相对光密度构成一个矩阵,用Matlab软件进行主成分分析(PCA),用Dice法计算相似性指数CS,用MEGA 4.1软件构建系统发育树,进行聚类分析。之后,采用LB、察氏和高氏三种培养基结合的纯培养分离方法,从毒死蜱处理土样中分离具有降解功能的菌株。分别提取纯培养物的染色体DNA,利用ERIC-PCR对分离到的降解菌进行基因组指纹图谱分析,将典型肠杆菌基因间的重复共有序列–聚合酶链式反应(ERIC-PCR)指纹图谱类型的代表菌株进行16S rRNA基因(细菌和放线菌)或ITS区(真菌)扩增并测序,测序结果提交GenBank基因库,并进行BLAST比对,初步确定降解菌株的分子地位。重要结论:本实验条件下,毒死蜱降解符合一级动力学,5 mg/kg和20 mg/kg毒死蜱浓度下的降解方程分别为y=5.252e-0.09x和y=19.41e-0.08x。DGGE指纹图谱显示,毒死蜱施用后土壤真菌群落结构与对照相比发生很大改变,且毒死蜱处理样品真菌群落结构保持基本稳定,多样性指数明显提高(见图2b);主成分分析显示,毒死蜱处理样品与对照明显分在2个不同的区域,充分表明毒死蜱对土壤真菌群落结构影响迅速且持久(见图3b)。毒死蜱处理样品细菌群落结构只在试验前30天与对照相比明显不同,60天时已经恢复对照水平(见图2a),同时主成分分析图上,毒死蜱处理样品与对照也越来越靠近,最后聚在一起(见图3a),说明毒死蜱对土壤细菌群落结构影响短暂。最后,获得了9个典型的ERIC型毒死蜱降解菌株。 相似文献
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质粒DNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。 相似文献
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水生植物床去除富营养化水源水中藻毒素的机制 总被引：1，自引：0，他引：1
为净化富营养化水源水中的藻毒素,在太湖湖滨进行了水生植物床(AVB)技术试验.该技术对MC-RR和MC-LR的平均去除率分别达63.0%和66.7%.用酶联免疫吸附法检测发现水生植物根部对藻毒素的富集能力大于茎叶部位.用荧光原位杂交法在AVB的底泥中检测到2种已知的藻毒素降解细菌,证明微生物降解作用的存在.植物根系原生动物相和后生动物相丰富,盾纤虫、钟虫、旋轮虫、腔轮虫是优势种,原生动物和后生动物的捕食作用在蓝藻和藻毒素的去除中发挥着积极作用. 相似文献
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微生物降解有机磷农药的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
果蔬菜等农产品有机磷农药残留越来越严重,利用微生物降解有机磷农药,在改善环境和人们生活质量方面已显得经济而有效。本文就降解有机磷农药的微生物种类,降解机制及编码降解酶的相应基因,以及工程菌的构建作了综述。 相似文献
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联合运用固相微萃取和加压毛细管电色谱(pCEC)方法测定水中痕量丙烯酰胺.以活性炭吸附富集样品中的丙烯酰胺,甲醇洗脱,萃取回收率稳定,平均为59.0%,萃取体积比可达到100倍,因此获得约60倍的富集效率.萃取洗脱液用配有紫外检测器的加压毛细管电色谱仪测定,标准曲线法定量.方法的线性下限浓度为5ng/ml,线性关系良好,相关系数r=0.999. 相似文献
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In this study, methanethiol(MT)-degradation bacteria were cultivated by using MT, methanol and trimethylamine as carbon sources under anaerobic conditions. It was found that the batch bacteria used MT and methanol as carbon sources grew faster than those used trimethylamine. The enriched bacteria used MT and methanol as the carbon sources were respectively inoculated in different biotrickling filters. The biological conversion performance of MT under anaerobic conditions was investigated in biotrickling filters. The results showed that the performance of the biotrickling filter inoculated with the bacteria enriched using MT was better than that inoculated with the bacteria enriched using methanol. When the inlet concentration of MT was 0.005vol%(50,ppm), the empty bed residence time was 50 s, p H value was 8.0, and the flow rate of the nutrient solution was 10 L/h, the removal efficiency of MT reached 95.3%. Adding methanol stimulated the growth of the biomass and the degradation of MT, but caused that some bacteria only degrading methanol outcompeted the bacteria only degrading MT. The concentration of sodium bicarbonate in the nutrient solution needed to be controlled lower than 30 g/L, otherwise, it would be harmful to the degradation of MT. 相似文献
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从沉积物的潜在降解活性、外加不同碳源后一定时间内所得到的多环芳烃降解菌的数量及其生物总量这几方面，对泉州湾海域沉积物中微生物对多环芳烃的降解活性进行研究，以期对泉州湾海域的污染有更深的了解，找到更好的方法对沿海多环芳烃污染进行治理。 相似文献
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LAS降解菌分离、驯化及降解能力的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过实验,从长期被洗涤涤剂污染的土壤中获得了对十二烷基苯磺酸钠(LAS)降解能力较强的细菌,在一定条件下测定了该菌种的生长情况及对LAS的降解能力.24小时内,菌体生长很快,40mg/ l的LAS的菌悬液的吸光度 (OD值) 达0.781,240mg/ l的OD 值为0.509. 在48小时内, 40mg/ l的 LAS 的去除率为 59.41%,高浓度的LAS(240mg/ l)的去除率为31.63%;240小时内,40mg/ l的LAS去除率为85.71%,240mg/ l的LAS去除率为 38.76%. 相似文献
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土壤中降解农药微生物的类别及降解特性 总被引：10，自引：1，他引：10
化学农药是常见的环境污染物，微生物降解农药是治理农药污染的重要手段．已发现的能降解农药的微生物主要有细菌、真菌和放线茵．微生物降解农药其实质是酶促降解，农药可作为微生物生长的碳源、氮源和能源，有的微生物以共代谢方式降解农药．环境因子和农药的化学结构均影响微生物对农药的降解．筛选和分离具有高效降解特性的菌株，构建遗传工程茵具有广阔的应用前景． 相似文献
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考察了两种新型甲壳低聚糖表面活性剂在河沟水中的降解情况,结果发现缩水甘油醚型非离子表面活性剂—（2-羟基-3-十六烷氧基）丙基甲壳低聚糖具有良好的生物相容性,可生物降解;季铵盐型阳离子表面活性剂-（2-羟基-3-二甲基十二烷基铵基）丙基甲壳低聚糖具有杀菌、灭藻作用,在水体中能够稳定存在。 相似文献