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1.
通过化学修饰合成了噻虫嗪（thiamethoxam,TMX）人工半抗原,采用碳二亚胺法（EDC）将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备了分子结合比合理的免疫抗原（TMX-BSA）和包被抗原（TMX-OVA）.对经TMX-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行了间接ELISA和阻断ELISA,初步明确了抗噻虫嗪多克隆抗体（TMX-pAb）的免疫学特性,为噻虫嗪残留免疫学快速检测技术开发和检测产品研制奠定了坚实基础. 相似文献
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通过醛化法将膝沟藻毒素(GTX2,3)分别与血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备完全抗原,高效液相色谱法(HPLC)检测醛化反应前后游离GTX2,3的浓度,完全抗原免疫Balb/C小鼠,间接酶免疫吸附试验检测免疫后血清中抗体效价。GTX2,3与KLH及BSA偶联反应前溶液中毒素的浓度分别为760μg·mL-1和660μg·mL-1,偶联反应后毒素的浓度分别为191μg·mL-1及256μg·mL-1,Balb/C小鼠经过5次免疫后血清的效价为1：500。结果表明,反应后游离的GTX2,3的浓度降低,制备的GTX2,3完全抗原免疫小鼠后小鼠产生抗GTX2,3抗体,说明GTX2,3与载体蛋白发生偶联反应,偶联物具有免疫原性。 相似文献
3.
《河南职业技术师范学院学报(职业教育版)》2021,(1)
制备并鉴定针对重金属镉离子的小鼠多克隆抗体.选取异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)做金属螯合剂,偶联Cd~(2+)及载体蛋白BSA、OVA,制备人工抗原并鉴定,配合佐剂乳化后以高、中、低剂量分别免疫Balb/C小鼠,以获得较好的抗重金属镉离子小鼠多克隆抗体血清.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定所获抗体的效价、敏感度、特异性.结果显示:小鼠抗血清效价均在10~(-3)～10~(-4),中剂量抗原免疫组小鼠抗体血清更加稳定、特异性强,利用该组多抗建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线,M-3号小鼠敏感性最强,回归方程为y=0.1123x-0.1638,IC_(50)质量浓度为368.70μg/L,检测限质量浓度为25.53μg/L,该抗体除与汞离子螯合物的交叉反应率为72.58%之外,与Cu~(2+)、Zn~(2+)、Pb~(2+)、Cr~(3+)、Mo~(6+)、Fe~(3+)、Co~(2+)均无交叉反应.获得了能用于镉离子免疫检测的高效价Cd~(2+)多抗,为检测产品的开发打下基础. 相似文献
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《河南职业技术师范学院学报(职业教育版)》2020,(3)
为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/m L,单克隆抗体稀释倍数为1∶32 000,酶标二抗稀释倍数为1∶4 000,最低检测限为1.01 ng/m L,批内和批间变异系数分别为3.80%和6.30%,建立的回归方程为y=-10.7x+66.042(R~2=0.996 9),建立了快速检测氯霉素残留的间接竞争ELISA法. 相似文献
6.
目的:建立酶联免疫吸附法(EUSA)以检硫酸雌酮的含量.方法:首先合成硫酸雌酮-BSA,然后将其作为包被抗原,建立检测硫酸雌酮的间接EUSA法.结果:建立了检测硫酸雌酮的标准曲线y=9E-5X+0.0998,该ELISA法灵敏度为0.69 ng.mL-1,批内和批间变异系数分别为8.8%和10.3%,与孕酮、炔雌醇、睾酮的交叉反应不明显.结论:初步建立了定量测定硫酸雌酮含量的间接酶联免疫吸附试验方法(EUSA). 相似文献
7.
先用DEAE-Sephadex A 50离子交换层析,然后用CM-Sephadex C 50离子交换层析,最后用12%SDS-PAGE制备电泳纯化尖吻蝮蛇出血毒素Ⅲ。将含出血毒素Ⅲ的聚丙烯酰胺凝胶磨细免疫小鼠,制备抗血清。ELISA检测显示制备的抗血清IgG能够与天然的出血毒素Ⅲ结合,Western blot检测结果显示制备的抗血清只与出血毒素Ⅲ特异结合,制备的抗血清可以用于免疫组织化学实验,为以后检测血毒素Ⅲ的结合位点打下了基础。 相似文献
8.
目的：制备并鉴定破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,为破伤风的快速检测及致病机制的研究提供实验材料。方法：用破伤风类毒素做抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度针对破伤风类毒素的杂交瘤细胞株,测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接ELISA和Western-blot检测单克隆细胞株的特异性。结果：通过细胞融合和克隆化,筛选出3株持续分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E12、1E11、1G10。间接ELISA和Western-blot检测结果表明1E12、1E11、1G10可以和破伤风类毒素发生特异性反应。结论：成功制备了抗破伤风类毒素单克隆抗体,为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定了基础。 相似文献
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10.
目的:研究α-硫辛酸对热应激引起小鼠睾酮分泌失调的保护作用.方法:将性成熟雄性SPF昆明小鼠60只,随机分为3组,即对照组、热应激组和α-硫辛酸+热应激处理组.分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清睾酮含量,石蜡切片免疫组化染色法(IHC)分析各组小鼠非折叠蛋白反应信号通路的关键信号转导调节分子肌醇需求酶1(IRE1)在睾丸中的表达定位,以及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠IRE1和促凋亡基因半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达量变化.结果:与对照组相比,热应激组的血清睾酮含量显著下降(P<0.01),睾丸组织中IRE1和Caspase-3蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.01);与热应激组相比,α-硫辛酸+热应激处理组的血清睾酮含量显著升高(P<0.05),在睾丸生精小管和间质细胞中均可观察到IRE1蛋白的阳性免疫染色,但IRE1蛋白阳性细胞数量显著减少(P<0.05),IRE1和Caspase-3的蛋白表达量均显著降低(P<0.05,P<0.05).结论:热应激能够抑制小鼠睾丸睾酮的分泌,降低血清睾酮的含量;在本试验条件下,添加60 mg/(kg·d)的α-硫辛酸能够有效增加热应激状态下小鼠的血清睾酮含量,其发挥保护作用的机制可能与α-硫辛酸抑制IRE1介导的非折叠蛋白反应信号通路激活、降低凋亡促进基因Caspase-3的蛋白表达量有关. 相似文献
11.
制备并纯化小鼠腹水IgG,鉴定IgG纯度;免疫新西兰大白兔制备兔抗小鼠IgG的抗血清并纯化血清IgG;用改良过碘酸钠法制备兔抗小鼠IgG酶标抗体,对其进行鉴定,并与市场上的同类产品对比。结果,纯化的小鼠腹水IgG,其纯度约为80%—90%;免疫新西兰大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价在1:32以上;用改良过碘酸钠法制备酶标兔抗小鼠IgG酶标结合物与市场同类产品相比质量优良,特异性较强,亲和力较好,并在较长时间内效价稳定。结果表明,制备的小鼠IgG抗血清和酶标抗体,适合于小鼠的血清学检测体系的建立。 相似文献
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《赣南师范学院学报》2021,(6):74-77
柑橘黄龙病菌CpaB基因编码一种菌毛组装蛋白(Flp pilus assemble protein),前期研究已经证实该蛋白具有外分泌性.在本研究中,首先构建pET30a-CpaB重组载体,然后将其转化BL21(DE3)感受态细胞,重组菌在37℃,0.2 mmol·L(-1) IPTG诱导下,CpaB蛋白可被成功诱导表达,经过Ni-NTA亲和柱纯化后,获得纯度较高的CpaB重组蛋白,分子量为28.2 kDa,以其为抗原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;采用Western blot对多抗血清的特异性进行分析,结果显示该多抗能特异性结合纯化的CpaB蛋白;进一步使用制备好的CpaB抗血清对感染黄龙病和健康的柑橘样品进行DTBIA检测,具有较好的区分度.这些研究结果为柑橘黄龙病快速检测体系的建立提供理论参考. 相似文献
13.
利用Suzuki偶联反应制备了新型含甲氧基三苯胺-芴共聚物(PF-MeOTPA),通过核磁共振(NMR)、红外(FT-IR)等对中间单体及聚合物进行了表征.制备了氧化铜纳米粒子(CuO NPs),通过X射线衍射和透射电镜(TEM)对纳米粒子结构进行了表征.制备了以纯PF-MeOTPA膜,PF-MeOTPA/CuO NPs复合膜为活性层的三明治结构的电存贮器件,对器件进行了电流-电压特性测试和循环稳定性测试,研究结果表明:所有器件均表现出二元flash型存储特性,基于PF-MeOTPA/CuO NPs的电存储器件表现出更加优异的电存储特性,最佳开关电流比(ON/OFF)达到了1.1×104,表明CuO NPs的加入有效地降低了器件的阈值电压和读取的误读率. 相似文献
14.
为了提高抗肿瘤药物vismodegib合成反应的产率并控制反应成本,制备了合成目标化合物所需的中间体,并对Negishi偶联反应条件进行了考察.通过单因素分析法,研究了不同的摩尔比、催化剂用量和回流时间对反应的影响.结果表明,在反应混合物2-溴吡啶、2-氯-N-(4-氯-3-碘苯基)-4-(甲磺酰)苯甲酰胺、氯化锌、正丁基锂和四(三苯基膦)钯的摩尔比为1.0∶0.5∶1.5∶1.1∶0.05及回流时间为24 h的条件下,反应收率提高到了72%.该反应条件明显提高了合成效率,避免了原料/催化剂的过多消耗,同时避免了过长的反应时间.反应体系配比和反应时间的优化在合成vismodegib的过程中对提高效率和经济性有重要作用. 相似文献
15.
用极谱法研究了酸性大红GR(AS GR)与牛血清白蛋白(BSA)在pH=7.43的Tris-HC1缓冲溶液中的相互作用,证明加入BSA后,AS GR的还原峰电位正移,峰电流二阶导数值与BSA的浓度在一定范围内呈线性关系,可望用于BSA的定量测定.求得AS GR与BSA的结合比为1:1,结合常数β=1.167×105L/mol. 相似文献
16.
应用荧光光谱法研究了水杨酸和牛血清白蛋白(BsA)分子间的相互作用.研究表明水杨酸可猝灭BsA的荧光,同时自身的荧光增强并存在一个等发射点,表明两者之间形成稳定的复合物并发生能量转移.水杨酸和BSA分子间的结合常数为6.06×104L/mol,结合数1.08. 相似文献
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李华刚 《黔南民族师范学院学报》2008,28(3)
利用滴涂于玻碳电极(GCE)表面的以Nafion膜中负电性的磺酸基与天青I(AI)阳离子之间的静电作用,实现天青I在电极上的固定化,再通过静电吸附和自组装技术将纳米CdS吸附的辣根过氧化物酶(HRP)修饰到电极表面,制备出性能良好的H2O2生物传感器.采用循环伏安法(CV)和计时电流法考察了该传感器的电化学性质.实验表明,该传感器具有良好的生物催化活性,较高的灵敏度,良好的选择性和稳定性,且易于制作等特点.响应电流与H2O2浓度在8.0×10-6~1.6×10-3mol/L范围呈现良好的线性关系,检出限为2.72×10-6mol/L. 相似文献
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5-氟脲嘧啶与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱,研究了5-氟尿嘧啶(5-Fu)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用.发现在pH为7.4三羟甲基胺基甲烷-盐酸缓冲溶液(Tris-HCl)中,随着5-Fu浓度的增加,BSA的特征紫外吸收峰逐渐增强,特征荧光峰的荧光强度逐渐减弱,说明它们之间存在相互作用.计算得到25℃时5-Fu与BSA的表观结合常数KA为7.1×104L·mol-1,结合位点数为1.18.5-Fu与BSA的相互结合作用为荧光静态猝灭过程. 相似文献
20.
将恒电流外电解Mn(II)产生Mn(Ⅲ)与流动注射化学发光法结合,基于盐酸氯丙嗪可被Mn(Ⅲ)氧化产生化学发光且发光强度与其浓度在一定范围内呈线性关系,从而建立了测定盐酸氯丙嗪的流动注射化学发光新方法。该法在盐酸氯丙嗪的浓度为3×10-7～1×10-4g/ml范围内呈线性关系,检测限为9×10-8g/ml,相对标准偏差为1.6%(n=11,1×10-6g/ml)。该法具有简便、快速、重现性好等特点。成功地应用于片剂中盐酸氯丙嗪的测定。 相似文献