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1.
目的:本试验旨在探究猪耳皮肤组织块在4℃冷藏条件下保存后,考察其成纤维细胞的细胞活力、细胞周期及细胞骨架等特性变化。方法:采集猪耳皮肤组织,分别冷藏保存2、4、7d后,进行成纤维细胞分离培养,同时设立新鲜组织块对照组,观察组织块原代细胞培养开始贴壁以及80%汇合的时间,再传至第3代,MTT检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞周期,免疫荧光染色检测细胞骨架的变化。结果:与对照组相比,各保存组成纤维细胞经组织原代培养后开始贴壁和80%汇合时间滞后,细胞形态都良好;保存7d的细胞活力与对照组相比显著性降低;保存4d和7d的G0/G1期细胞显著性增加,保存7d的S期细胞显著性降低;各组细胞具有良好的骨架系统,各给药组微管蛋白的荧光强度与对照组也无显著差异。结论:猪耳缘组织块在4℃保存后,经原代培养和继代培养,可获得具有正常增殖活力和细胞特性的成纤维细胞。 相似文献
2.
目的:探讨影响大鼠胚胎成纤维细胞(REF)分离和培养的一些因素,以建立稳定的REF培养体系.方法:取SD大鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对REF的生长形态、生长曲线进行观察,以探讨不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对REF分离及培养的影响,并对其进行免疫细胞化学鉴定.结果:13.5d 胎龄鼠胚的REF分离效果优于10.5d、18.5d 胎龄鼠胚;REF在体外为贴壁生长型细胞,第三代细胞增殖旺盛;并表达波形蛋白(vimentin)、层黏连蛋白(laminin,LN)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白.结论:13.5d 胎龄SD大鼠REF以H-DMEM做培养基,在第3代增殖旺盛,合成多种细胞外基质,最适宜作胚胎干细胞或其它悬浮培养细胞的饲养层. 相似文献
3.
应用组织块法和酶消化法进行原代大鼠颌下腺细胞(rat submandibular gland cells,RSGCs)分离培养,通过免疫细胞化学法检测细胞角蛋白-8的表达,经DAB染色均呈阳性,提示培养细胞为上皮细胞来源。在倒置显微镜下观察细胞数量、生长情况和生长周期,两种方法所培养的原代大鼠颌下腺细胞均生长良好,相互聚集形成腺泡、腺管样结构或呈铺路石状。其中酶消化法所培养细胞贴壁较好,生长周期短,细胞数量更多。提示酶消化法分离培养较组织块法更易获得大量RSGCs,为以颌下腺细胞作为实验载体的涎腺非肿瘤性疾病的研究奠定了实验基础。 相似文献
4.
目的:研究大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)分离、培养以及诱导向内皮细胞分化的方法。方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离单个核细胞,经贴壁后定向诱导培养2周。以CD34、CD133、VEGFR-2、vWF免疫细胞化学、荧光染色法以及Dil-acLDL结合FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPCs。结果:贴壁细胞经培养诱导后3d开始伸展,4~7 d形成细胞集落,10~21 d增殖加速呈典型的“鹅卵石“样外观,并出现条索状结构且呈“微血管样“排列生长。细胞免疫荧光染色鉴定CD34、CD133、VEGFR-2、vWF阳性,Dil-acLDL联合FITC-UEA-1双染阳性。结论:从大鼠骨髓中分离单个核细胞,体外诱导培养后可以表现出部分内皮细胞的特征。 相似文献
5.
目的：探讨SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法的可行性.方法：分离并消化大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,采用胶原酶消化组织块方法,并进行免疫组化鉴定.结果：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,易体外贴壁,经消化酶消化后,24h内贴壁的细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达较其它时段贴壁的细胞高.结论：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原代培养可行,对研究ED病治疗机制有重要意义. 相似文献
6.
目的:纯化和鉴定体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞.方法:取1~3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养,通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等,采用免疫组化法检测星形胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定星形胶质细胞.结果:培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛,第3代95%以上为星形胶质细胞,特异性抗原GFAP表达阳性.结论:该方法操作简单,可靠,是一种有效的新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法. 相似文献
7.
目的:探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定.方法:分别取孕14～16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养,用光学显微镜观察NSCs的生长情况,并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达,经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测.结果:①培养出来的细胞可以扩增生长;②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性;③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后,免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性.结论:采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs. 相似文献
8.
目的：从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞．观察其生长、增殖及分化．方法：采取无血清培养和单细胞克隆技术．采用原代贴壁及传代悬浮方法．培养获得细胞克隆．利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞．结果：从新生SD大鼠脑室下区分离的组织，经原代和传代培养均可形成细胞克隆．且具有增殖能力．原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase．NSE)抗原呈阳性．神经干细胞可分化为神经元．结论：用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力．属于中枢神经系统的干细胞． 相似文献
9.
采用动物组织块培养法对四鳃鲈（Trachidermus fasciatus）内脏组织进行离体培养研究.对培养条件进行了优化,比较了不同培养基（DMEM、M199）、不同生长条件（加生长因子、不加生长因子）和不同培养条件（CO2培养箱、恒温培养箱）下离体培养细胞的生长情况.结果显示：内脏组织接种后3～5 h,细胞迁移伸展,6 d后生长细胞集群汇合,来源于不同组织的再生细胞呈现不同的形态.在M199培养基中添加青链霉素抗生素（0.28%）及10%小牛血清和1%碱性成纤维生长因子、控温27℃、pH值为7.2～7.4并在CO2（5%）培养箱中培养的内脏细胞生长最快.不同来源的组织培养中肝细胞在离体培养中细胞增殖生长速度最快. 相似文献
10.
目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。 相似文献
11.
Chun-mao Han Li-ping Zhang Jin-zhang Sun Hai-fei Shi Jie Zhou Chang-you Gao 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2010,11(7):524-530
To create a scaffold that is suitable for the construction of tissue-engineered skin, a novel asymmetric porous scaffold with
different pore sizes on either side was prepared by combining a collagen-chitosan porous membrane with fibrin glue. Tissue-engineered
skin was fabricated using this asymmetric scaffold, fibroblasts, and a human keratinocyte line (HaCaT). Epidermal cells could
be seen growing easily and achieved confluence on the fibrin glue on the upper surface of the scaffold. Scanning electron
microscopy showed typical shuttle-like fibroblasts adhering to the wall of the scaffold and fluorescence microscopy showed
them growing in the dermal layer of the scaffold. The constructed composite skin substitute had a histological structure similar
to that of normal skin tissue after three weeks of culture. The results of our study suggest that the asymmetric scaffold
is a promising biologically functional material for skin tissue engineering, with prospects for clinical applications. 相似文献
12.
Ze-wei Tao Long-gui Li Zhao-hua Geng Tao Dang Shan-jun Zhu 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2010,11(4):238-248
Therapeutically delivered mesenchymal stem cells (MSCs) improve ventricular remodeling. However,the mechanism underlying MSC cardiac remodeling has not been clearly determined. Congestive heart failure (CHF) was induced in rats by cauterization of the left ventricular free wall. MSCs were cultured from autologous bone marrow and injected into the border zone and the remote myocardium 5 d after injury. Ten weeks later,when compared with sham operation,CHF significantly increased nucleus mitotic index,capilla... 相似文献
13.
探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3～5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5～6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。 相似文献
14.
植物组织细胞壁结构和成分的特化是细胞长期进化过程中与功能相适应的结果。表皮细胞细胞壁的角质化及角质层、周皮木栓层细胞的栓质化,使表皮、周皮具有防止水分过度蒸发、阻止病虫害侵入的保护功能。厚角组织和厚壁组织细胞壁不同程度、不同成分的加厚,是机械组织在植物体不同发育阶段与功能的适应。穿孔、筛板等细胞壁结构的特化以及细胞壁的木质化充分体现了输导组织的功能特点。 相似文献
15.
Accumulating evidence indicates that endostatin inhibits fibrosis. However, the mechanism is yet to be clarified. The aim of this study is to evaluate the effect of endostatin on platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB)-or transforming growth factor β1 (TGF-β1)-induced fibrosis in cultured human skin fibroblasts, and to further examine the molecular mechanisms involved. Human dermal fibroblasts were cultured in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) and serum-starved for 48 h before treatment. Cells were grouped as follows: “PDGF-BB”, “PDGF-BB+ endostatin”, “TGF-β1”, “TGF-β1+endostatin”, “endostatin”, and “blank control”. The fibroblasts were stimulated with either TGF-β1 or PDGF-BB for 72 h in order to set up the fibrosis model in vitro. The cells were co-cultured with either TGF-β1 or PDGF-BB and endostatin and were used to check the inhibiting effect of endostatin. A blank control group and an endostatin group were used as negative control groups. The biomarkers of fibrosis, including the expression of collagen I, hydroxyproline, and α-smooth muscle actin (α-SMA), were evaluated using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blot. The expression of phosphorylated PDGF receptor β (p-PDGFRβ), PDGFRβ, phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (p-ERK), and ERK was detected using Western blot and immunofluorescent staining was used to explore the mechanisms. Both PDGF-BB and TGF-β1 significantly up-regulated the expression of collagen I, hydroxyproline, and α-SMA. Endostatin significantly attenuated both the PDGF-BB- and TGF-β1-induced over-expression of collagen I, hydroxyproline, and α-SMA. PDGF-BB and TGF-β1 both promoted the expression of PDGFR, ERK, and p-ERK. Endostatin inhibited the expression of PDGFR and p-ERK but did not affect the expression of total ERK. Endostatin inhibited hypertrophic scar by modulating the PDGFRβ/ERK pathway. Endostatin could be a promising multi-target drug in future fibrosis therapy. 相似文献
16.
Qing-jun Liu Wei-wei Ye Hui Yu Ning Hu Li-ping Du Ping Wang 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2010,11(5):323-331
Neurochip based on light-addressable potentiometric sensor(LAPS),whose sensing elements are excitable cells,can monitor electrophysiological properties of cultured neuron networks with cellular signals well analyzed.Here we report a kind of neurochip with rat pheochromocytoma(PC12) cells hybrid with LAPS and a method of de-noising signals based on wavelet transform.Cells were cultured on LAPS for several days to form networks,and we then used LAPS system to detect the extracellular potentials with signals d... 相似文献
17.
曹胜高 《南京师范大学文学院学报》2011,(3):161-169
师心论通过圆融处理物我关系,形成了物我双观、两忘与合一,成为盛唐诗歌基本的观照方式。而在此基础上所形成的“搜求于心”,成为中晚唐诗歌创新的出口,推动了险怪诗风的发展。晚唐“心师造化”基础上发展出来的活法为诗,成为宋调中的唐音论,被作为宋诗救弊的参照。 相似文献
18.
新形势下如何有效开展高校新生辅导员工作 总被引：3，自引：0，他引：3
新形势下,针对大学新生入学后面对环境改变而产生的诸如心理、思想等方面的变化,高校新生辅导员工作也同样面临许多新的挑战。为解决这一问题,笔者结合自身工作经历从坚持身正为范不断提升自我,坚持以人为本竭诚服务学生和坚持抓核心、抓典型、抓规范等三个方面谈对做好新生辅导员工作的认识和体会。 相似文献