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为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB／c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1：1．28×10^3,单抗腹水效价达1：1．024×10^6,IC50为68．31ng／mL,属于IgM型,轻链kappa,CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。 相似文献
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克百威单克隆抗体的制备及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB／CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水．腹水效价达10^-6～10^-7。琼脂双扩试验表明各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白均为IgG2a亚类。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,并测定抗体蛋白含量为3～8mg／mL;用SDS—PAGE进行纯度鉴定,电泳图谱均显示了IgG抗体及其重链和轻链条带,分离的抗体纯度在90％以上。对纯化的单抗5E2进一步做交叉反应试验,与其他氨基甲酸酯类杀虫剂残杀威、速灭威、灭多威、甲奈威、异丙威、仲丁威的交叉反应率分别为7．2％、4．5％、2．8％、7．9％、9．5％、8．9％,结果表明单抗5E2有较好的特异性。 相似文献
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《科技风》2017,(12)
为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。 相似文献
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《西藏科技》2015,(7)
同肺癌相关的血清标志物CK19,其存在或量变不仅可以指示肿瘤性质,还可以指导肿瘤的诊断、分类、预后以及治疗。本次研究使用BALB/C小鼠进行免疫(使用CK19的重组抗原),血清滴度进入平台期后将骨髓瘤细胞与前期经过免疫的小鼠脾细胞融合,进一步将细胞克隆化,共得到6株杂交瘤细胞株(能持续稳定分泌抗CK19抗体)。对6株抗CK19的单抗株进行腹水诱导和扩大培养,并将诱导得到的腹水进行纯化,采用亲和层析法。为获得一个最灵敏的双抗体夹心单抗配对,将纯化后的单抗株做正交配对的筛选并制备酶标抗体。最终获得了最优配对:11E6+16A5-HRP。灵敏度分析的检测结果显示,该配对对CK19重组抗原的检测灵敏度为15.6ng/ml。 相似文献
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应用犬肾传代细胞 (MDCK) ,通过人“O”型红细胞吸附和氯仿处理等方法 ,从美国犬四联弱毒疫苗中分离出一株腺病毒 ,经形态、理化及生物学特性等系统鉴定证明 :该毒株是犬Ⅱ型腺病毒 ,命名为CAV2 XN3 株。实验将该病毒复制成弱毒疫苗 ,免疫 8只 2月龄当地幼犬 ,经临床观察证明 ,试验犬未出现不良反应 ;免疫后 14天采血测定血清中和抗体效价达到 1∶12 8,免疫后 2 5天血清中和抗体效价达到 1∶2 5 6 ,免疫后 10个月降至 1∶32 ,但仍能耐受强毒攻击 ,而对照组 4只犬则发病死亡。表明该弱毒疫苗激发免疫快 ,免疫期长 ,安全有效。 相似文献
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本文对5种分泌抗霍乱肠毒素单克隆抗体的生物学性质作了较详细的研究。研究表明,4株抗CT-McAb细胞株经鉴定3 A_(10)株为抗AB单克隆抗体,而3H_7、3C_7、1F_8为抗B亚单位单克隆抗体。4株细胞株对数增殖期的群体倍增时间为19～21h。双扩散证明,上述单抗为IgG_1型抗体。腹水抗体经-30℃贮存5年,仍保持原有的各种抗体特性。细胞通过体外连续传代30代以上,复经液氮冻存2年后,仍能恒定地分泌单克隆抗体。腹水抗体经硫酸铵纯化,IgG_1纯度经PAGE电泳分离及CS-910双波长薄层扫描技术,并以电子计算机算出IgG_1纯度为95.063％,酶标记抗体对CT的检测具有较高的特异性和敏感性。 相似文献
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抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体 相似文献
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陈子毅 《科学对社会的影响》1994,(3):27-32
目前生物工程技术在商业上的种种应用中,单克隆抗体在数量上居领先地位。这在很大程度上是由于单克隆抗体在体外诊断上的应用。体外诊断制品不必像经过体内服用药品那样严格的安全检验。以单克隆抗体为基础的产品数量的增加是由于杂交瘤技术以及抗体功能知识的进展。单抗技术的进一步改进将使其在制药工业包括体内诊断,预防法、治疗法上得到大量应用。 来自人细胞的(而不是啮齿动物)杂交瘤(单克隆抗体分泌细胞系)己被应用到制药工业上。来自人细胞的单克隆抗体应用于内服药物比来自鼠的在免疫反应上害处要少些。在技术上,人杂交瘤的制备仍然在襁褓中,但从人的细胞系生产单克隆抗体的进展将促进以单克隆抗体为基础的新药和替代药物。 相似文献
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鉴于血管内皮细胞生长因子受体(KDR)的重要生物学作用,我们采用杂交瘤技术制备能稳定分泌抗KDR单克隆抗体的杂交瘤细胞。本文就抗KDR单克隆抗体制备过程中所涉及的技术改进作一总结。 相似文献
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本文报道使用三株霍乱弧菌型特异性单克隆抗体(VC-McAb),以干菌快速酶标法对1088株历年分离保存的霍乱弧菌EL-Tor生物型菌株进行了血清型和流行菌型的分型鉴定,并与原有的血清学、噬菌体和生物分型比较,证明VC-McAb对菌株的分型率分别为小川型流行株90.42％,小川型非流行株97.04％,稻叶型流行株89.34％和稻叶型非流行株93.94％。本法快速(仅需2h)、简便、敏感、特异,对霍乱弧菌血清型和流行菌型的快速分型鉴定,具有较大的实用价值。 相似文献
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目的研究适合的蛋白纯化和病毒灭活工艺,制备静脉注射用人SARS特异性免疫球蛋白.方法采用低温乙醇和离子交换层析相结合的工艺进行分离纯化,在分离纯化过程中对血浆进行S/D病毒灭活,对原液进行纳米膜过滤去除病毒.对产品的SARS抗体效价、灭活剂残余含量进行检测,对血浆S/D病毒灭活工艺进行验证.结果产品的各项质量指标符合静脉注射要求,产品中SARS抗体效价经ELISA法检测为183,产品中灭活剂TNBP和Triton-X100的残余含量均＜5.0 ug/ml.病毒灭活方法经验证可以有效灭活指示病毒.结论本蛋白纯化工艺可操作性强、产品质量稳定,为从突发病毒性疾病患者康复期血浆中小规模提取特异性免疫球蛋白提供了一种适合的方法. 相似文献
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杂交瘤技术在血液学的理论研究和临床实践中巳得到广泛的应用。就血型单克隆抗体而言,已见有不少报道。我们在继建立分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC_9后,又建成了一侏能分泌抗人B型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMB_1。本文将对ZMB_1的建侏和初步鉴定结果作一报道。 相似文献
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光合细菌HZPSB菌株的分离鉴定及其生长特性的测定 总被引：5，自引：0，他引：5
光合细菌HZPSB株分离自淡水养殖池塘底泥,经富集与纯化培养,菌落形态、培养特征和菌体形态学观察,细胞吸收光谱及生理生化特性测定,鉴定为类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)。用分光光度计测定菌液的OD530值,与用平板计数法测得的细菌浓度相对照,推导出细菌浓度与光密度的直线回归方程:Y=(-0.1445 12.065×OD530)×D(D为稀释倍数),相关系数r=0.9994。测定了HZPSB株的生长规律及最佳培养条件,其最佳培养条件为29℃、3000lx、pH7.0、千分之十盐度和1∶4的接种量。 相似文献
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目的 研究胰岛素样生长因子 2(IGF II)对小鼠成骨细胞株MC3T3 E1细胞促增殖、存活和影响一氧化氮(NO)水平的作用.方法 体外培养成骨细胞株MC3T3 E1细胞,分别加入不同浓度的IGF II,用MTT法、酶化学法检测MC3T3 E1细胞增殖和NO水平的变化.结果 IGF II对MC3T3 E1细胞有促增殖作用,在1～100ng/mL范围内呈浓度依赖性;第3天时100ng/mLIGF II组的NO水平明显低于对照组(P<0.01);培养5天和6天后,对照组细胞6天OD值明显低于5天OD值(P<0.01),而100ng/mLIGF II组细胞6天OD值则显著高于5天OD值(P<0.01).结论 IGF II能促进MC3T3 E1细胞的增殖,抑制细胞NO产生,并具有抗MC3T3 E1细胞死亡作用. 相似文献
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目的研究胰岛素样生长因子-2(IGF-II)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞促增殖、存活和影响一氧化氮(NO)水平的作用.方法体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞,分别加入不同浓度的IGF-II,用MTT法、酶化学法检测MC3T3-E1细胞增殖和NO水平的变化.结果 IGF-II对MC3T3-E1细胞有促增殖作用,在1～100 ng/mL范围内呈浓度依赖性;第3天时100 ng/mL IGF-II组的NO水平明显低于对照组(P<0.01);培养5天和6天后,对照组细胞6天OD值明显低于5天OD值(P<0.01),而100 ng/mL IGF-II组细胞6天OD值则显著高于5天OD值(P<0.01).结论 IGF-II能促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制细胞NO产生,并具有抗MC3T3-E1细胞死亡作用. 相似文献
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为探不同离心力(转速)对抗体效价检测结果的影响,文章中以检测鸡新城疫抗体效价为验证试验,用100份鸡血液经不同离心力分离血清开展检测,结果表明抗体效价检测结果和离心力(转速)相关性不大,不同离心力分离动物血清对抗体效价检测结果影响不显著。 相似文献