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1.
比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度（98.4%）明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型. 相似文献
2.
在中枢神经系统内,星形胶质细胞和神经元之间存在着密切的结构和功能联系,谷氨酸是神经元与胶质细胞相互作用的重要信息物质。星形胶质细胞可以通过P2X7型嘌呤能受体,连接蛋白“半通道”和Ca2 依赖性胞吐等三种方式释放谷氨酸。P2X7型受体是离子型受体,被ATP激活,是生理条件下调节谷氨酸释放的一种重要方式;连接蛋白“半通道”是在病理情况下,尤其是细胞外二价阳离子降低时开放,调节谷氨酸释放;Ca2 依赖性胞吐与神经末梢释放递质的方式相似,胞内Ca2 升高时,囊泡和星形胶质细胞膜融合释放谷氨酸,是生理状态下释放谷氨酸的主要方式。 相似文献
3.
目的:纯化和鉴定体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞.方法:取1~3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养,通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等,采用免疫组化法检测星形胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定星形胶质细胞.结果:培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛,第3代95%以上为星形胶质细胞,特异性抗原GFAP表达阳性.结论:该方法操作简单,可靠,是一种有效的新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法. 相似文献
4.
目的：研究AST （astaxanthin,AST）对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC-12）细胞氧化损伤的保护作用.方法：选取PC-12细胞体外培养后,随机分为正常对照组、甲基苯丙胺组、低剂量AST（0.1 μmol·L-1）＋甲基苯丙胺组、中剂量AST （1.0 μmol·L-1）＋甲基苯丙胺组、高剂量AST（10.0 μmol·L-1）＋甲基苯丙胺组,通过研究PC-12细胞的存活率以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,还原性谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量的变化,评价AST的保护作用.结果：甲基苯丙胺能导致细胞存活率下降,同时也使SOD活性和GSH的含量降低,MDA含量增加.经过一定浓度的AST共处理后,细胞存活率显著提高,SOD活性和GSH含量也显著提高,MDA含量显著降低.结论：AST对甲基苯丙胺诱导的PC-12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关. 相似文献
5.
目的:研究microRNA-638(miR-638)在神经胶质瘤U251细胞中的表达丰度,以及miR-638的表达对神经胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响,从而探讨miR-638在U251细胞中促进胶质瘤发生发展的分子机制.方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人正常星形胶质细胞系(NHA)与胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达水平;U251细胞转染miR-638模拟物后,MTT实验以及细胞划痕实验检测miR-638的表达对U251细胞的增殖以及迁移作用的影响.结果:与正常人脑星形胶质细胞相比,胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达上调(P0.01);miR-638的表达能促进U251细胞的迁移能力,但是不影响细胞增殖能力(P0.05).结论:miR-638在U251神经胶质瘤细胞中高表达,对胶质瘤细胞迁移有促进作用,miR-638可能具有促进胶质瘤U251细胞发生发展的作用. 相似文献
6.
目的:评估帕瑞昔布对过氧化氢诱导的大鼠原代星形胶质细胞氧化应激状态的保护作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次在大鼠原代星形胶质细胞中证实帕瑞昔布对过氧化氢诱导的氧化应激具有保护作用,且此作用可能与Bax、Bcl-2和BDNF的失调有关。方法:设立如下四组对照:(1)阴性对照组;(2)100μmol/L H_2O_2处理组(处理时间为24 h);(3)80μmol/L帕瑞昔布处理组;(4)160μmol/L帕瑞昔布处理组(第三和第四组先用帕瑞昔布处理24 h,再用100μmol/L H_2O_2处理24 h)。用荧光显微镜观察星形胶质细胞的形态,用MTT法检测星形胶质细胞的存活率,用荧光探针二氯荧光黄双乙酸盐(DCDHF-DA)检测星形胶质细胞内氧自由基的含量,并用碘化丙啶(PI)染色检测细胞的凋亡状态。最后用反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测Bax、Bcl-2和BDNF三种蛋白在4组中的表达水平。结论:H_2O_2处理可以导致星形胶质细胞的形态发生改变(图1)和存活率降低(图2),提高星形胶质细胞内的氧自由基水平(图3),同时诱导细胞凋亡(图4)。然而,所有这些变化都可以被帕瑞昔布逆转。此外,我们发现,Bax、Bcl-2和BDNF的表达水平在H_2O_2处理时失调,而在帕瑞昔布预处理时恢复正常。综上所述,帕瑞昔布对H_2O_2诱导的氧化应激具有保护作用。 相似文献
7.
张卫东 《南阳师范学院学报》2007,6(3):51-54
在运动时间延长和运动量增大的情况下，通过观察发现，运动对大鼠体重、肌酸激酶、血尿素、海马和纹状体BDNF表达、海马和纹状体GFAP表达都产生了一定的影响。对照组海马和纹状体均有BDNF阳性细胞的表达，并以神经元表达为主。运动组海马和纹状体BDNF和GFAP阳性细胞表达较对照组显著增加（P〈0.05，P〈0．01），且出现明显的时间效应；说明BDNF与GFAP均参与中枢疲劳产生的神经生物学调控。星形胶质细胞可加快Glu代谢，减轻其对神经元损伤。 相似文献
8.
目的:比较重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)与甲基泼尼松龙(methylprednisolone,MP)早期治疗大鼠脊髓挫伤的形态学变化.方法:采用BenchmarkTM 颅脑损伤撞击器制备大鼠脊髓挫伤模型,损伤30 min后,rHuEPO组腹腔注射(ip)rHuEPO(5000 UI·kg-1·BW),MP组尾静脉注射(iv)甲泼尼龙琥珀酸钠(30 mg·kg-1·BW).采用Harris氏HE染色,Luxol固蓝染色,神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色,观察损伤脊髓组织.结果:损伤1,3 d后,MP组挫伤中心及前、后3,5 mm处灰质前角神经元存活数量、残存髓鞘面积及抑制星形胶质细胞数均高于rHuEPO组.损伤14,28 d后,rHuEPO组挫伤中心及邻近部位囊腔区域面积和星形胶质细胞抑制率高于MP组.同时,rHuEPO组挫伤中心及前、后3,5 mm处灰质前角神经元存活数量、残余髓鞘面积均显著高于MP组(P<0.05).结论:30 mg·kg-1·BW MP早期治疗大鼠脊髓挫伤第一周能显著改善神经元存活、髓鞘脱失和星形胶质细胞增生.随着时间的延长,rHuEPO的长期疗效逐渐显著. 相似文献
9.
益智仁对束缚应激致大鼠海马神经元NMDA受体亚基NR2B表达的调节作用 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究益智仁对束缚应激致大鼠海马神经元NMDA受体亚基NR2B表达的调节作用,将30只SD大鼠随机等分为正常对照组、模型对照组和益智仁治疗组。模型对照组、益智仁治疗组大鼠每日束缚1次,连续3周。益智仁治疗组束缚前给予益智仁水提取物灌胃。采用免疫组织化学方法,观察益智仁水提取物对束缚应激大鼠海马神经元NMDA受体亚基NR2B表达的调节作用。结果显示NR2B阳性产物呈深棕色或棕褐色,主要沉积在CA1区和CA3区锥体细胞的细胞膜周边。与正常对照组比较,模型对照组的NR2B阳性产物明显增多(P﹤0.01);益智仁治疗组与模型对照组比较,NR2B阳性产物明显减少(P﹤0.05)。实验结果提示益智仁能够降低束缚应激大鼠海马CA1区和CA3区NMDA受体亚基NR2B的表达。 相似文献
10.
用半定量RT-PCR和流式细胞术，研究了白血病细胞系KG1a中P2X7受体在基因和蛋白水平的表达。用荧光分光光度计，测定了用激动剂三磷酸腺苷（ATP）和苯甲酰苯甲酸ATP（BzATP）刺激前后细胞内钙离子浓度的变化，证明P2X7受体的功能。结果表明：KG1a细胞表达P2X7受体，且在激动剂的刺激下能引起KG1a细胞通过P2X7受体的胞外钙内流；去除胞外钙离子时，激动剂不能引起胞内钙浓度的升高；提示KG1a细胞表达P2X7受体的基因和功能蛋白，激活该受体引起胞外钙离子的内流。 相似文献
11.
瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F,PS-F）对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型,通过倒置显微镜观察细胞形态,caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性,荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后,细胞出现萎缩变圆,折光率降低,caspase 3活性显著升高,呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1,1.0,10.0μmol·L-1）瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响,降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示,瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡,其机制可能与增加CREB的表达有关。 相似文献
12.
目的：研究IL-4mRNA和IL-4蛋白在哮喘大鼠CD34^＋细胞中的转录表达及孟鲁司特（montelukast,MK）对其表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为3组：哮喘组、MK组和正常对照组。用卵白蛋白制备大鼠哮喘模型。应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血浆中IL-4和γ-干扰素（IFN-γ）浓度;用MiniMACS磁珠分选系统分离骨髓CD34^＋细胞;采用SYBRGREEN I荧光实时定量PCR法测定CD34^＋细胞中IL-4mRNA的相对表达量。采用免疫组化技术测定CD34＋细胞中IL-4蛋白的表达量。结果：哮喘组骨髓CD34＋细胞中IL-4mR．NA和IL-4蛋白的表达量高于其它各组（p〈0．01）;哮喘组除了IFN-1水平低外,IL-4浓度和嗜酸性粒细胞（EOS）绝对值都是三组中最高的（P〈0．01）;除哮喘组外,其余组的各项指标相近（P〉0．05）。IL-4mRNA表达量与IL-4浓度、Eos绝对值呈正相关（P〈0．01）,与IFN-γ浓度呈负相关（P〈0．01）。结论：哮喘大鼠骨髓CD34^＋细胞中IL-4 mKNA的表达增强;孟鲁司特可以下调IL-4mRNA的表达。可能成为其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一。 相似文献
13.
目的：观察TGF-β1作用下,肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN在EMT过程中HDAC1、8的表达情况及TSA对TGF-β1诱导细胞EMT的影响。方法：将TGF-β1加入到体外培养的细胞中,于不同时间收取细胞,采用WB及Real-time RT-PCR检测HDAC1、8及E-cad、α-SMA的表达情况。然后将TGF-β1加入经过TSA预处理的细胞中,于不同时间收取细胞,重新检测上述基因。结果：加入TGF-β1后,E-cad蛋白表达下调;α-SMA蛋白表达上调;HDAC1蛋白表达上调;HDAC8蛋白表达下调。E-cad mRNA表达下调;α-SMA及HDAC8的mRNA均于12 h表达上调,6 h、24 h表达下调;HDAC1 mRNA表达于6 h下调,24 h上调。加入TSA后,E-cad蛋白表达上调;α-SMA、HDAC1及HDAC8蛋白的表达均下调。E-cad mRNA表达上调;α-SMA mRNA表达于6 h、12 h上调,24 h下调;HDAC1 mRNA表达下调;HDAC8 mRNA表达上调。结论：TGF-β1体外诱导的RLE-6TN细胞EMT,可以通过应用TSA抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型,从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮EMT。 相似文献
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Fu Y Wang SQ Liu YP Wang GP Wang JT Gong SS 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2008,9(4):299-305
Objective: To evaluate the transduction efficiency of a recombinant adenovirus carrying the gene for green fluorescent protein (Ad-GFP) into the primary cultures of fetal neural stem cells (NSCs) by the expression of GFP. Methods: The Ad-GFP was constructed by homologous recombination in bacteria with the AdEasy system; NSCs were isolated from rat fetal hippocampus and cultured as neurosphere suspensions. After infection with the recombinant Ad-GFP, NSCs were examined with a fluorescent microscopy and a flow cytometry for their expression of GFP. Results: After the viral infection, flow cytometry analysis revealed that the percentage of GFP-positive cells was as high as 97.05%. The infected NSCs sustained the GFP expression for above 4 weeks. After differentiated into astrocytes or neurons, they continued to express GFP efficiently. Conclusion: We have successfully constructed a viral vector Ad-GFP that can efficiently infect the primary NSCs. The reporter gene was showed fully and sustained expression in the infected cells as well as their differentiated progenies. 相似文献
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人参皂苷Rg1对β淀粉样肽诱导原代培养胎鼠皮质神经元损伤的保护作用 总被引：1，自引：0，他引：1
研究人参皂苷Rgl对β淀粉样肽诱导原代培养胎鼠皮质神经元损伤的保护作用。利用乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒检测胎鼠皮质神经元培养液中LDH活力,并用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定神经元存活率,观察人参皂苷Rg1对β淀粉样肽诱导原代培养胎鼠皮质神经元损伤的保护作用。结果显示：终浓度为5μmol／L、10μmol／L、15μmol／L的β淀粉样肽作用于皮质神经元48h后,培养液中LDH活力增高,神经细胞存活率下降,与不作任何处理的空白对照组比较,15μmol／L的β淀粉样肽组有显著性差异（P〈0．01）;经人参皂苷Rg1（20βLmol／L）预处理24h再加入15μmol／Lβ淀粉样肽作用48h,LDH活力下降,神经细胞的存活率升高,与仅加入15μLmol／Lβ淀粉样肽的损伤组比较差异显著（P〈0．01）。分析表明：人参皂苷Rg1能拮抗β淀粉样肽诱导的神经细胞损伤,对β淀粉样肽引起的神经细胞毒性有一定的保护作用。 相似文献
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添加不同类型脂肪酸对罗非鱼肝脏原代细胞内脂类代谢相关基因表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
初步探索了罗非鱼肝脏原代细胞分离、纯化的方法,并在此基础上研究培养基中外源添加不同饱和度的脂肪酸(16:0,18:1 n-9,18:2n-6,20:4 n-6,20:5 n-3和22:6 n-3)对其与脂类代谢相关基因(LPL、MDH和PPARα)mRNA表达的影响.结果表明:60 g,2 min,1次和30 g,2 min,2次的离心条件获得较高细胞产量及纯度;随脂肪酸不饱和程度的增加LPL和PPARαmRNA表达均呈现明显的上升趋势,而MDH则波动性较大. 相似文献
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以SD雄性大鼠为材料,采用慢性轻度不可预见性应激+孤养方法复制大鼠抑郁模型,比较促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)免疫阳性神经元在大鼠大脑皮质的区域分布特征。结果显示:CRH免疫阳性神经元在皮层的各层均有分布;与对照组(NC组)相比,模型组(MC组)大鼠CRH免疫阳性细胞在大脑皮质的运动皮质(M)、感觉皮质(S)、听皮质(Au)、梨形皮质(Pir)显著增加,嗅皮质(Ol)也有增加但不明显。结论:CRH免疫反应阳性细胞在大脑皮层内广泛分布,抑郁大鼠CRH在皮质的表达增加,提示其可能参与应激反应。 相似文献