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以pErl30a为载体构建的表达拟南芥热激因子AtHsfAla的大肠杆菌EcoliM15（pET30a／His6一AtHsfAla）为实验材料,以IPTG诱导6XHis融合蛋白的表达并经过Ni2＋柱分离纯化AtHsfAla,再通过SDS—PAGE鉴定表达蛋白和纯化蛋白．结果显示,AtHsfAla蛋白在在PET原核表达系统中能够有效表达,并能通过亲和层析获得纯化的AtHsfAla蛋白．研究结果为揭示拟南芥热激因子AtHsfAla的作用机理奠定基础． 相似文献
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以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1a C端氨基酸331到氨基酸486（简称△HsfA1a）的大肠杆菌Ecoli M15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IVFG）诱导表达△HsfA1a,再通过Ni—NTA—Agarose亲和层析纯化表达的△HsfA1a,通过SDS—PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的△HsfA1a． 相似文献
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在已有的pET30a/hs表达载体的基础上，构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后，转化入表达宿主大肠杆菌M15，IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35％)；表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2 亲和层析胶(Ni^2 —IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白，经SDS—PAGE鉴定为单一条带。 相似文献
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目的构建L-ficolin突变体的原核表达载体，为研究L-ficolin的糖结合位点奠定基础。方法设计L-ficolin突变体基因上、下游引物，分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点。以插入L—ficolin M2（Val144Phe）和M6（Glu 307Asp）点突变的完整编码区基因的质粒pCDNA3-L-ficolin为模板，通过PCR扩增获得突变体的基因片段，将其克隆入原核表达载体pGEX—KG．然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定；将此表达载体转化入表达菌BL21（DE3）pLvSs诱导表达。并采用SDS—PAGE对表达产物进行鉴定。结果经酶切及序列分析表明．成功地构建了重组原核表达载体pGEX-KG—L—ficolin—M2、pGEX-KG-L-ficolin—M6，SDS—PAGE显示目的蛋白大量表达。结论L—ficolin突变体融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达。为研究L-ficolin的糖结合位点打下基础。 相似文献
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本文用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(Disc—PAGE)和十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对旋毛虫肌肉幼虫的可溶性抗原进行了分析。结果表明经Disc—PAGE电泳后可辨认出16条带。经SDS—PAGE电泳后可辨出22条带,其中有6条主带,文中对各主带在保护性免疫及免疫诊断中的意义进行了讨论。 相似文献
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重组人B淋巴细胞刺激因子原核表达初探 总被引：1，自引：0，他引：1
借助SDS－PAGE分析方法，以重组人B淋巴细胞刺激因子（rhBLyS）蛋白表达宿主菌株M15（pQE30a/rhBLyS）作为研究对象，对于用IPTG诱导的重组目的的产物的表达进行了优化研究，分析比较了诱导时间、IPTG浓度、温度等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明，降低温度和IPTG浓度有利于增加靶蛋白的可溶性，27℃和0．075mmol/L为比较适合的表达条件。 相似文献
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根据Imbereehts等报道的EHEC F18菌毛主要亚单位(fedA)基因序列设计一对引物，以重庆地区仔猪水肿病流行强毒株W96基因组DNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增到约500bp的核酸片段。用常规DNA重组技术将该片段克隆到表达载体pET28b( )的SalI-Hindm位点之间构建重组表达质粒pET28fedA，序列测定结果显示该克隆片段长447bp，同源性分析表明该基因片段与GenBank报道的fedA核苷酸序列有99．4％的同源性，W96株fedA基因三处核苷酸发生变异，其中两个为无义突变，另一个导致Q100R突变。将pET28fedA转入BL21(DE3)中进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测上清存在约20KD的蛋白，6xHis affinity tag IMAC亲和层析显示该蛋白能被亲和纯化，说明是含有组氨酸标签的融合目的蛋白。 相似文献
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孙晓东 《陕西教育学院学报》2010,26(2):106-107,121
为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E．coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E．coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E．coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。 相似文献
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由O’Farrel等1975年建立的双向电泳技术是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术。双向电泳的原理是，第一向进行等电聚焦(isoelectric focusing，IEF)，蛋白质沿pH梯度分离至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行SDS—PAGE电泳，按分子量大小进行分离。样品经过电荷和质量两次分 相似文献