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1.
目的:研究CBR1基因启动子在猪子宫内膜细胞的表达调控机制。创新点:发现CBR1基因启动子在猪子宫内膜受到炎性因子核转录因子kappa B(NF-κB)成员p65调控。p65对该启动子具有正向调节作用,但是对于CBR1基因的表达并不是必需的。方法:通过双荧光素酶报告基因载体确定CBR1基因启动子转录活性区,通过染色质免疫沉淀(Ch IP)技术确定p65能够结合CBR1基因启动子,通过超表达和干扰表达实验证实p65对CBR1基因启动子的调控作用。结论:猪CBR1基因启动子-1640/-647区对于其转录活性是必需的,在-1545/-1531区存在p65的结合位点。p65在猪子宫内膜细胞中促进了CBR1基因mRNA的表达,但是干扰p65则不会造成CBR1基因mRNA表达量下降,推断p65不是CBR1基因表达的必需因素。 相似文献
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《集宁师专学报》2016,(5):1-4
该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。 相似文献
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根据已发表的序列，通过PCR技术克隆了一系列构建烟草叶绿体多顺反子表达载体所需的元件：质体核搪体（16S）RNA操纵元启动子（Prrn）、质体面A基因3’端（psbA3’）、山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因（BADH）、烟草叶绿体高频同源重组片段（psaA／psbC，大小3463bp）、甘露聚糖酶基因（man）、绿荧光蛋白基因（gfp）。构建了烟草质体多顺反子定点整合表达载体pLM7（-psaA-Prrn-SD-man-SD-gfp-SD-BADH-PSBA3’-PSBC-）。并在大肠杆菌中通过平板定性分析等方法对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定。 相似文献
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瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用及其对CREB的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F,PS-F）对鱼藤酮损伤的PC-12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC-12细胞为模型,通过倒置显微镜观察细胞形态,caspase 3活性检测试剂盒测定caspase 3活性,荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC-12细胞在4μmol·L-1鱼藤酮损伤后,细胞出现萎缩变圆,折光率降低,caspase 3活性显著升高,呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1,1.0,10.0μmol·L-1）瓜子金皂苷己能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响,降低caspase 3活性。荧光素酶报告基因标记显示,瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC-12细胞凋亡,其机制可能与增加CREB的表达有关。 相似文献
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为分析LPS刺激前后对RIPK2基因甲基化的影响,试验采用凝胶电泳、亚硫酸氢盐、双荧光素酶报告系统和qRT-PCR方法分析LPS刺激前后RIPK2基因的甲基化模式及甲基化相关试剂对鸡RIPK2启动子活性及表达水平影响。结果表明：LPS刺激后鸡RIPK2基因甲基化水平从53.8%下降至15.4%;5-氮杂胞苷显著性提高鸡RIPK2启动子活性,促进基因表达;而CpG甲基转移酶M. SssI显著性抑制鸡RIPK2启动子活性,抑制基因表达。研究结果对提高家禽免疫和控制过度性炎症反应具有十分重要的现实意义。 相似文献
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通过检测乳腺癌样本和正常组织样本中miR-222表达量，转染miR-222模拟物（mimics）和抑制物（inhibitors），用CCK-8和Transwell检测miR-222对乳腺癌细胞增殖能力和迁移能力的影响．进一步预测miRNA-222的靶基因，构建其过表达载体和预测靶基因的荧光素酶报告载体．通过双荧光素酶检测系统鉴定靶基因，点突变实验验证与靶基因的结合位点．RT-PCR检测miRNA-222过表达或抑制后对靶基因表达的影响．分析CDKN1b和CDKN1c高、低表达水平与乳腺癌患者生存率的关系．结果表明与正常乳腺组织比较，肿瘤组织中miR-222表达显著上升（P<0.0001）,miR-222的表达与淋巴结转移呈正相关．miR-222过表达后能促进乳腺癌细胞的增殖和迁移，反之则会抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移．双荧光素酶报告系统显示miRNA-222过表达能显著抑制CDKN1b和CDKN1c的荧光素酶活性，点突变实验证实miR-222通过“种子区”与CDKN1b、CDKN1c的靶位点结合，从而负向调控CDKN1b和CDKN1c的表达．过表达miRNA-222后CDKN1b和... 相似文献
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目的:检测Cd2+处理的He La细胞模型中HMOX1的表达变化,初步探索调控HMOX1转录的启动子的活化区域.方法:通过RT-PCR和Western Blot检测HMOX1m RNA与蛋白水平变化;通过系列报告基因检测初步鉴定HMOX1启动子的活化区域.结果:Cd2+处理的He La细胞模型中,和对照组0h相比,各处理组HMOX1 m RNA与蛋白水平变化显著上调,差异有统计学意义(P0.05);报告基因检测HMOX1-577-+92启动子片段荧光素酶相对活性显著低于其他组,差异有统计学意义(P0.05),HMOX1-120-+92启动子片段荧光素酶相对活性也显著降低,差异有统计学意义(P0.05).结论:Cd2+处理He La细胞模型中,HMOX1 m RNA与蛋白水平显著上调;HMOX1启动子-577~-470片段内存在抑制性转录因子结合位点,-692~-577和-272~-120片段内存在激活性转录因子结合位点. 相似文献
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刘芳 《周口师范学院学报》2012,29(5):66-70
通过N2吸附、X-射线衍射（XRD）和程序升温还原（TPR）等技术对载体和相应催化剂进行表征,考察了NiMo/Al2O3和NiMo/AC催化剂的加氢脱硫性能.结果表明,催化剂NiMo/AC上活性组分在载体活性炭表面高度分散,且活性组分与载体之间的相互作用较弱,催化剂表面的Ni,Mo活性相易于还原.在相同活性评价条件下,当以NiMo作为活性组分时,以氧化铝为载体的催化剂活性在低温时高于以活性炭为载体的催化剂,在较高温度时,两者活性相差不大. 相似文献
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采用PCR和染色体步移法克隆了鳡（Elopichthys bambusa）肌肉生长抑制素长789 bp的内含子1、987 bp的内含子2及长662 bp的部分上游启动子序列.同源性比对分析表明,鳡MSTN的内含子1、2与鲤科鱼类的同源性相对较高（内含子1：60.42%～67.21%;内含子2：40.00%～51.21%）,与其他鱼类、鸟类以及哺乳类动物的同源性则较低.生物信息学方法预测鳡MSTN的部分启动子序列中含有2个近转录起始点的TBP（TATA框）、2个CTF（CAAT框）、3个Sp1、10个C/EBP、4个Oct1、2个潜在AP1的结合位点,此外还存在1个GATA、3个HNF1、1个NF-κB和1个CREB等多种转录因子结合位点以及3个E-框. 相似文献
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从假单胞菌（Pseudomonassp．）XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础．以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框（0RF）克隆至融合表达载体pET30a（＋）进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析．实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E．coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92％以上．表达蛋白具有良好活性． 相似文献
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以pLF3为模板,PCR扩增得到葡聚糖酶的启动子,并将启动子基因重新连接到切除启动子基因及葡聚糖酶基因的pLF3载体上,构建pLF3-pro载体.采用PCR的方法扩增朱黄青霉总DNA中的α-1-6-葡聚糖酶基因,并插入到pLF3-pro载体上,构建pLF3-Pro-Dex质粒,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,酶切验证及PCR验证均表明成功构建了pLF3-Pro-Dex质粒,且重组质粒中的α-1-6-葡聚糖酶基因与朱黄青霉中的α-1-6-葡聚糖酶基因有93%的同源性. 相似文献
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大豆β-1,3-葡聚糖酶基因转化烟草及抗病性的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
构建了大豆β－１，３－葡聚糖酶（β－１，３－ｇｌｕｃａｎａｓｅ）基因的植物表达载体ｐＢＩ１２１－ｇｌｕ，并通过直接转化方法将其导入根癌农杆菌（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４受体菌中，构建了用于植物遗传转化的工程菌株ＬＢＡ４４０４（ｐＢＩ１２１－ｇｌｕ），并以烟草为转化对象进行了遗传转儿，获得了大量再生的转基因烟草．ＰＣＲ，ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｍ以及Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交检测结果表明目的基因已整合到烟草基因组中．转基因植株苗期抗立枯病实验表明，部分转化β－１，３－葡聚糖酶基因的工程烟草对立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ．）表明出不同程度的抗性提高． 相似文献
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目的：研究IL-4mRNA和IL-4蛋白在哮喘大鼠CD34^＋细胞中的转录表达及孟鲁司特（montelukast,MK）对其表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为3组：哮喘组、MK组和正常对照组。用卵白蛋白制备大鼠哮喘模型。应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血浆中IL-4和γ-干扰素（IFN-γ）浓度;用MiniMACS磁珠分选系统分离骨髓CD34^＋细胞;采用SYBRGREEN I荧光实时定量PCR法测定CD34^＋细胞中IL-4mRNA的相对表达量。采用免疫组化技术测定CD34＋细胞中IL-4蛋白的表达量。结果：哮喘组骨髓CD34＋细胞中IL-4mR．NA和IL-4蛋白的表达量高于其它各组（p〈0．01）;哮喘组除了IFN-1水平低外,IL-4浓度和嗜酸性粒细胞（EOS）绝对值都是三组中最高的（P〈0．01）;除哮喘组外,其余组的各项指标相近（P〉0．05）。IL-4mRNA表达量与IL-4浓度、Eos绝对值呈正相关（P〈0．01）,与IFN-γ浓度呈负相关（P〈0．01）。结论：哮喘大鼠骨髓CD34^＋细胞中IL-4 mKNA的表达增强;孟鲁司特可以下调IL-4mRNA的表达。可能成为其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一。 相似文献
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Zhong-dong Wang Fan-yong Qu Yuan-yuan Chen Zhang-shen Ran Hai-yan Liu Hai-dong Zhang 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2017,18(1):27-36