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1.
《实验技术与管理》2015,(12):66-68
目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。 相似文献
2.
目的:研究microRNA-638(miR-638)在神经胶质瘤U251细胞中的表达丰度,以及miR-638的表达对神经胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响,从而探讨miR-638在U251细胞中促进胶质瘤发生发展的分子机制.方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人正常星形胶质细胞系(NHA)与胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达水平;U251细胞转染miR-638模拟物后,MTT实验以及细胞划痕实验检测miR-638的表达对U251细胞的增殖以及迁移作用的影响.结果:与正常人脑星形胶质细胞相比,胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达上调(P0.01);miR-638的表达能促进U251细胞的迁移能力,但是不影响细胞增殖能力(P0.05).结论:miR-638在U251神经胶质瘤细胞中高表达,对胶质瘤细胞迁移有促进作用,miR-638可能具有促进胶质瘤U251细胞发生发展的作用. 相似文献
3.
通过检测乳腺癌样本和正常组织样本中miR-222表达量，转染miR-222模拟物（mimics）和抑制物（inhibitors），用CCK-8和Transwell检测miR-222对乳腺癌细胞增殖能力和迁移能力的影响．进一步预测miRNA-222的靶基因，构建其过表达载体和预测靶基因的荧光素酶报告载体．通过双荧光素酶检测系统鉴定靶基因，点突变实验验证与靶基因的结合位点．RT-PCR检测miRNA-222过表达或抑制后对靶基因表达的影响．分析CDKN1b和CDKN1c高、低表达水平与乳腺癌患者生存率的关系．结果表明与正常乳腺组织比较，肿瘤组织中miR-222表达显著上升（P<0.0001）,miR-222的表达与淋巴结转移呈正相关．miR-222过表达后能促进乳腺癌细胞的增殖和迁移，反之则会抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移．双荧光素酶报告系统显示miRNA-222过表达能显著抑制CDKN1b和CDKN1c的荧光素酶活性，点突变实验证实miR-222通过“种子区”与CDKN1b、CDKN1c的靶位点结合，从而负向调控CDKN1b和CDKN1c的表达．过表达miRNA-222后CDKN1b和... 相似文献
4.
《实验技术与管理》2014,(1)
目的:构建microRNA的表达载体,再转染生物体细胞观察该microRNA的转录或表达情况,以获知它的作用机理及对生物体的影响。方法:以microRNA-21(简化为miR-21)为例说明构建表达载体的方法。根据microRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共约470个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切后,用T4连接酶进行连接反应,并转化入感受态细胞,筛选后对重组质粒进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析,并将其转染Hela细胞,经RT-PCR实验检测其表达情况。结果:pcDNA3.1(+)/miR-21过表达载体转染细胞后使得miR-21在细胞中过表达。结论:成功构建了miR-21的真核表达载体,为进一步研究miR-21功能及作用机制奠定实验基础。 相似文献
5.
《赤峰学院学报(自然科学版)》2017,(5)
目的:通过建立体外大鼠终板软骨细胞自然退变模型,探讨miR-125a-5p在自然传代诱导大鼠终板软骨细胞退变中的表达,通过生物信息学软件预测相关靶基因.方法:取大鼠原代终板软骨细胞,应用胰酶消化法和自然传代法培养终板软骨细胞,分别选取P2、P5、P8代细胞进行甲苯胺蓝及阿辛蓝染色观察细胞形态改变.qRT-PCR检测终板软骨细胞中miR-125a-5p表达情况,通过生物信息学软件预测相关靶基因.结果:细胞传到P5代时细胞由多角形变成长梭形,外基质分泌减少,细胞形态发生退变改变,qRT-PCR检测结果显示mi R-125a-5p表达含量随细胞代数增加逐渐减少.结论:大鼠终板软骨细胞自然传代至P5代出现退变改变,miR-125a-5p与终板软骨退变有密切联系. 相似文献
6.
康洁 《商丘师范学院学报》2006,22(5):133-136
为了证明p21是抑制细胞生长所必须的因子,我们用p21融合基因载体转染NIH3T3细胞,观察它的形态变化和生长周期,免疫印迹检测p21的表达和其下游蛋白PRb的磷酸化情况.结果显示NIH3T3细胞出现了衰老样变化,生长周期延长,生长速度缓慢;在转染了p21基因的NIH3T3细胞中PRb磷酸化程度降低.实验表明,过量表达的p21基因是通过降低PRb磷酸化水平抑制DNA的转录来抑制细胞生长的. 相似文献
7.
目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响.方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析.以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MM P2和MM P9以及MDV原癌基因Meq的表达情况.结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达.信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程.转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05).结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRN A可能参与M D肿瘤转化过程. 相似文献
8.
目的 :探讨p5 3蛋白在食管癌组织发生中表达的意义。方法 :应用免疫组织化学技术检测 72例食管鳞状上皮癌 ,19例增生鳞状上皮及 17例正常食道鳞状上皮中 p5 3蛋白的表达。结果 :p5 3在食管癌组织中的阳性率为 4 7.95 % (35 / 72 ) ,在增生鳞状上皮中的阳性率为 36 .84 % (7/ 19) ,在正常食道鳞状上皮中的阳性率为 5 .88% (1/ 17) ,正常组与增生组和癌变组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。p5 3蛋白与癌的分化程度、淋巴结有无转移和浸润深度等指标均无明显关系。结论 :p5 3蛋白与食管癌的发生、发展有关。 相似文献
9.
《莆田学院学报》2015,(5):11-15
研究Foxp3在三株人肺癌细胞系A549、NCI-H209和95-D中的表达情况及其对肺癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。实时荧光定量RT-PCR和Western-blot方法检测Foxp3在三株肺癌细胞系中的m RNA和蛋白水平;构建Foxp3干扰RNA,并瞬时转染A549细胞;MTS细胞增殖实验、细胞侵袭及划痕实验研究Foxp3对A549细胞体外增殖、侵袭以及转移能力的影响。结果:在三株肺癌细胞系中,相对于正常肺上皮细胞,Foxp3的m RNA和蛋白水平均呈高表达,其中在A549细胞中表达水平最高。细胞免疫荧光检测发现Foxp3主要定位于肺癌的细胞质中。瞬转Foxp3干扰RNA至A549细胞,可以明显促进肺癌细胞的侵袭和转移,但是对肺癌细胞的增殖无显著影响。此外,还发现干扰Foxp3表达可以显著上调MMP-9和u PA的表达水平。结果表明,Foxp3在肺癌细胞中呈高表达,其在肺癌中可能发挥抑癌作用。 相似文献
10.
目的：探讨17β-雌二醇（E2）调节人绒毛癌细胞系JEG-3的microRNA的表达.方法：定量PCR检测E2对microRNA的表达.结果E2能够促进JEG-3 miR16、miR126、miR335、miR451、miR491-5p、miR-520g和miR612的表达,降低miR-26b和miR-29b的表达.结论：E2能够对JEG-3细胞的microRNA表达产生调节作用,提示我们在妊娠过程中E2可以通过调节microRNA来影响滋养层细胞增殖、迁移、浸润和血管重塑等功能,并可能为探讨子痫前期等的发病机制提供线索. 相似文献
11.
12.
13.
目的:研究mi R-718和早期生长反应蛋白3(EGR3)在肝癌细胞系Hep G2及SMMC-7721中对细胞恶性行为的作用。创新点:首次在肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721中发现miR-718作为抑癌基因及EGR3作为促癌基因起到调控肿瘤恶性行为的作用。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法构建mi R-718和EGR3的过表达及敲降质粒,并采用实时定量PCR(q RT-PCR)方法验证质粒有效性;采用MTT法和克隆形成实验检测肝癌细胞系HepG 2和SMMC-7721的生长增殖能力;采用Transwell迁移侵袭实验检测肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721的迁移和侵袭能力;采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体实验验证miR-718的靶基因;采用qR T-PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测相关基因表达水平的变化。结论:mi R-718在肝癌细胞系HepG 2和SMMC-7721中起到抑癌基因的作用;EGR3在肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721中起到促癌基因的作用;miR-718是通过靶定EGR3 m RNA 3'UTR下调EGR3的表达起到抑癌基因的作用。 相似文献
14.
设计小鼠Txt5基因的特异性引物,将小鼠c DNA作为模板,用PCR扩增出m Txt5编码区,并加入HA标签序列.将这一片段插入p MD-18T载体,再亚克隆至p Adtrack-cmv穿梭载体上.线性化后,转化BJ5183感受态细胞,在BJ5183中发生同源重组获得p Ad-Txt5质粒.p Ad-Txt5线性化后转染293A细胞,包装得到含Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过RT-PCR和免疫印迹法检测HA标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达. 相似文献
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抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。 相似文献
16.
[目的]研究β-连环素与p63基因在大鼠舌部鳞状细胞癌中的表达,探讨它们在口腔鳞状细胞癌增殖中的作用.[方法]免疫组织化学方法检测48例不同分化程度大鼠舌部鳞状细胞癌中β-连环素与p63基因的表达.[结果]8例高分化口腔鳞状细胞癌中分别有7和6例高表达p63与β-连环素.β-连环素和p63表达与大鼠舌部鳞状细胞癌的组织学分级不具有显著性差异(P>0.05).[结论]β-连环素在大鼠舌鳞状细胞癌增殖中的作用与在人回顾性研究中的作用相似. 相似文献
17.
目的：克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法：取人新鲜正常子宫内膜组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增Lumican基因,将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot 检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果：重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切,获得8311 bp片段和865 bp插入片段,序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致;荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达;转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调,Lumican蛋白相对上调率为74．62％（P＜0．05）。与对照组细胞比较,转染Lumican 基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21．35％±2．78％。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican,该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力,为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。 相似文献
18.
建立共表达人μ阿片受体（humanμ-opiatereceptor,hMOR,OPRM）与Gq蛋白的CHO-Flp In稳定细胞模型,并鉴定其药理学功能,可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT,并进行鉴定;然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-Flp In细胞,经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆,采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株;最后,通过RT-q PCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5m RNA表达水平进行检测,并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示：经酶切确定了重组质粒的正确构建;通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株,其中15号细胞株的荧光信号值最高,命名为Gq-OPRM1-CHO;与对照组相比,Gq-OPRM1-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因m RNA水平分别升高约400倍和120倍;在Gq-O... 相似文献
19.
目的 :探讨 p2 7Kip1、VEGF在胆管癌中的表达及相互关系。 方法 :采用免疫组化技术检测 32例胆管癌标本中p2 7Kip1及VEGF的表达。结果 :p2 7Kip1、VEGF在胆管癌和正常胆管组织中的阳性表达率分别为 5 6 .2 5 %和 11.1% (P <0 .0 1) ;81.2 5 %和 33.3% (P <0 .0 1)。p2 7Kip1、VEGF在胆管癌中的表达具有相关性 (P <0 .0 5 ) ,与分化程度、转移水平有关 ,与大小、生存期无关。结论 :p2 7Kip1、VEGF在胆管癌中高表达 ,p2 7Kip1、VEGF与胆管癌的发生、发展有关。 相似文献
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目的:寻找一种或多种能预测人类表皮生长因子受体2(Her-2)阳性乳腺癌患者是否发生淋巴结转移及其预后的分子标志物。创新点:本研究发现,miR-455与Her-2阳性乳腺癌转移相关,可能是一个预测Her-2阳性乳腺癌患者淋巴结转移和预后的分子标志物。miR-455可以通过与长链非编码RNA人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的相互作用,在乳腺癌的淋巴结转移过程中发挥重要功能。方法:通过下载肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中与乳腺癌相关的微小RNA(miRNA)测序数据,筛选与乳腺癌淋巴结转移相关的miRNA,进一步分析这些miRNA与乳腺癌患者预后的相关性。同时,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测这些miRNA在不同程度淋巴结转移的Her-2阳性乳腺癌患者组织中的表达水平,及其与预后的相关性。通过细胞学实验研究过表达miR-455对Her-2阳性乳腺癌细胞系MDAMB-453增殖和侵袭能力的影响,并用qRT-PCR检测过表达miR-455对MALAT1表达的影响。结论:miR-455可能是Her-2阳性乳腺癌患者淋巴结转移和预后的潜在预测因子。 相似文献