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耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参与了植物的抗旱过程.我们利用基因工程手段首先构建了植物DR1372-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法成功将目的基因DR1372转入拟南芥中,最后对阳性植株进行盐胁迫,证实了DR1372基因在拟南芥中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性.初步建立了农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥体系,为后续DR1372基因的功能研究工作提供了理论基础. 相似文献
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耐辐射奇球菌(Deinococcus.Radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究.其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制.本研究利用基因工程手段以载体pBI121为基础构建了植物DR1172-EHA105表达载体,然后利用农杆菌介导法将目的基因DR1172转入油菜中,得到再生油菜植株97株,阳性植株48棵,转化植株阳性率为49.48%.该研究为探讨DR1172基因的功能以及植物抗逆性提供了丰富的植物材料,而且对利用生物工程技术手段改良植物性状,培育出抗逆性强的植物优良品种有重要的指导价值. 相似文献
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《绵阳师范学院学报》2014,(8):78-82
冷激蛋白(cold shock proteins Csps)作为细菌中RNA的分子伴侣,含有原始型的冷休克结构域,具有与核酸结合功能,可以防止RNase对mRNA的降解,也能纠正mRNA的折叠错误,为了寻找作物改良的潜在基因资源,从耐辐射奇球菌(Deinnoccus radiodurans DR1)基因组中克隆出csp2基因,利用农杆菌侵染法转化甘蓝型油菜,通过两代纯化得到T2代转基因油菜种子,以15%聚乙二醇溶液(PEG6000)为渗透介质模拟干旱胁迫条件,对非转基因油菜和转csp2基因油菜种子萌发期抗旱性进行评价.结果显示:PEG胁迫下,转csp2基因油菜的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数,以及胚芽和培根的生长发育程度均高于非转基因油菜.从而表明,csp2基因能够促进植物细胞从逆境伤害中快速恢复. 相似文献
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《赣南师范学院学报》2020,(6):87-93
生物体内的铁蛋白Ferritin在储存和释放铁离子、抗氧化胁迫和病菌侵染过程中发挥着重要作用.为探索玉带凤蝶(Papilio polytes)铁蛋白的功能,本研究开展了对玉带凤蝶铁蛋白亚基的鉴定,分析其组织表达谱和铁离子胁迫下的表达水平.基于玉带凤蝶基因组数据库,鉴定了铁蛋白轻链亚基(PpFerLCH)和重链亚基(PpFerHCH)基因并且克隆出2个基因的开放阅读框(ORF);利用生物信息学,对其结构域以及与其他物种的进化关系进行分析;采用实时荧光定量PCR技术分析两个亚基在不同组织以及铁离子胁迫下的表达水平.玉带凤蝶PpFerLCH基因cDNA全长为1207 bp,其开放阅读框为696 bp,编码231个氨基酸,预测其蛋白分子量为26.5 kDa,理论等电点为5.64;PpFerHCH基因cDNA全长为1 300 bp,ORF为636 bp,编码211个氨基酸,预测其蛋白分子量为23.7 kDa,理论等电点为6.53.结构域分析显示PpFerLCH和PpFerHCH都含有一个保守的铁蛋白结构域,而PpFerHCH具有Ferrihydrite nucleation center.系统发育树分析揭示PpFerLCH主要与烟草天蛾(Manduca sexta)以及大蜡螟(Galleria mellonella)铁蛋白重链亚基保持较高的同源性,而PpFerHCH与烟草天蛾具有较近的亲缘关系.实时荧光定量PCR分析表明PpFerLCH和PpFerHCH在玉带凤蝶的中肠和马氏管中表达量较高,而在其他组织表达量相对较低.此外,FeCl_3刺激24以后,PpFerLCH和PpFerHCH能够被显著诱导上调表达.本研究为进一步研究玉带凤蝶铁蛋白的功能奠定基础. 相似文献
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第3组LEA蛋白及其基因研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
胚胎晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是一种脱水保护剂,能够在干旱胁迫条件下保护生物大分子,尤其是膜结构的稳定性,减轻干旱造成的伤害.对其研究主要集中在植物胚胎学以及逆境生理学的领域.综述了有关第三组LEA蛋白及其基因的近年研究进展,这些基因的表达或蛋白累积与植物的渗透胁迫抗性呈正相关,第3组LEA基因可能具有的干旱保护功能已初步证实,同时分析了其广泛的应用前景. 相似文献
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[目的]应用生物信息学分析人类新基因乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(Polym erase)反式调节蛋白(HBVDNAPTP1)结合蛋白(HBVDNAPTP1BP).[方法]利用生物信息学技术分析HBVDNAPTP1BP基因的染色体定位与组织表达,以及编码蛋白的化学物理性质与结构特征.[结果]HBVDNAPTP1BP基因染色体定位于1号染色体短臂3区5带1亚带,可在组织中低表达,但在多个组织中无表达.HBVD-NAPTP1BP的相对分子量为11 905.6,理论pI为7.72,不同条件下的消光系数为14 230 M-1cm-1或13 980M-1cm-1(280 nm),在体外哺乳动物网状细胞中的半寿期为30 h,并且无卷曲螺旋区域,但具有3个较强的疏水区域.HBVDNAPTP1BP无特殊二级结构,仅有1个蛋白激酶C磷酸化位点,不具有跨膜螺旋结构,无信号肽序列,定位于细胞核中.[结论]应用生物信息学对HBVDNAPTP1BP进行了分析,为进一步研究其生物学功能及其在乙型肝炎、肝细胞癌中的作用机制提供了依据和线索. 相似文献
7.
目的获得重组TsARG2基因蛋白,为进一步研究其功能和制备特异抗体奠定基础.方法根据已报道的TsARG2基因序列,采用RT-PCR的方法获得TsARG2基因.将所得的PCR产物插入原核表达载体pQE30中,得重组质粒(pQE/TSARG2)并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有六个组氨酸的融合蛋白,采用镍固定金属亲和层析法纯化.结果序列分析表明TSARG2基因成熟肽编码区含有918bp,编码305个氨基酸;与GenBank(AY040204)中已报道的TSARG2分离物的核苷酸序列有100%同源性.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的66%,分子质量约为35kDa.经Ni2 -NTAagarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论在大肠杆菌中获得了TsARG2基因蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础. 相似文献
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绿僵菌是一类广泛应用于生物防治的昆虫病原真菌.研究表明小RNA能够调控基因的表达,其中Argonaute基因在整个小RNA通路中发挥重要的作用.本研究通过RT-PCR的方法从绿僵菌中获得了Argonaute基因的部分功能片段,构建了其重组原核表达载体,将重组载体转化至大肠杆菌进行诱导表达;采用镍柱亲和纯化重组的目的蛋白并通过Western blot技术鉴定.结果发现：通过RT-PCR的方法获得长度约为950bp的基因片段;重组原核表达载体经诱导表达后,SDS-PAGE检测发现分子量约为34kDa的目的蛋白条带;诱导5h后蛋白的表达量最高,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,经Western blot技术检测,重组蛋白可与His-tag抗体发生特异性反应.该纯化重组蛋白的获得为将来绿僵菌Argonaute蛋白抗体的制备,并进一步通过该抗体获得绿僵菌体内的小RNA及其靶基因提供了基础. 相似文献
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增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),也称周期蛋白或DNA聚合酶的辅助蛋白,是真核细胞合成所必需的核蛋白,在DNA复制中起重要作用。前期实验发现日本七鳃鳗肝脏cDNA文库的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)中存在与高等脊椎动物pcna基因同源的序列。提取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)肝脏组织RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗pcna基因,对其进行生物信息学分析,并将Lj-pcna基因成功构建到pGFP-N2真核表达载体上,重组质粒PGFP-N2-Lj-pcna转染人Hela细胞,荧光显微镜下观察有荧光蛋白的表达。日本七鳃鳗pcna基因的真核表达载体成功构建和转染,为探讨七鳃鳗pcna基因功能研究及其它七鳃鳗相关研究提供条件。 相似文献
10.
目的:原核表达并纯化大型溞胆碱酯酶(ChE),制备鼠抗大型溞ChE多克隆抗体,并对抗体的适用性进行研究。创新点:首次通过原核表达获得了大型溞重组ChE蛋白,通过免疫小鼠获得了高效价、高特异性的多克隆抗体,通过样品检测证明了抗体的适用性。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术获得大型溞ChE基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET-29a(+),构建重组表达质粒p ET-ChE,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达;对表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶活性检测,并对蛋白进行纯化(图4);使用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体(图5),用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对处于三唑磷和低温胁迫下以及经反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量变化进行检测(图7、表6和7),以评价抗体的可适用性。结论:获得了高纯度的ChE重组蛋白;免疫小鼠后,获得了特异性强、高效价的抗体;通过对处于三唑磷和低温胁迫下以及经过反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量的检测,证明了抗体的适用性。 相似文献
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Huang LF Hua XT Lu HM Gao GJ Tian B Shen BH Hua YJ 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2006,7(5):373-376
RecQ is a highly conserved helicase necessary for maintaining genome stability in all organisms. Genome comparison showed that a homologue of RecQ in Deinococcus radiodurans designated as DR1289 is a member of RecQ family with unusual domain arrangement： a helicase domain, an RecQ C-terminal domain, and surprisingly three HRDC domain repeats, whose function, however, remains obscure currently. Using an insertion deletion, we discovered that the DRRecQ mutation causes an increase in gamma radiation, hydroxyurea and mitomycine C and UV sensitivity. Using the shuttle plasmid pRADK, we complemented various domains of the D. radiodurans RecQ （DRRecQ） to the mutant in vivo. Results suggested that both the helicase and helicase-and-RNase-D-C-terminal （HRDC） domains are essential for complementing several phenotypes. The complementation and biochemical function of DRRecQ variants with different domains truncated in vitro suggested that both the helicase and three HRDC domains are necessary for RecQ functions in D. radiodurans, while three HRDC domains have a synergistic effect on the whole function. Our finding leads to the hypothesis that the RecF recombination pathway is likely a primary path of double strand break repair in this well-known radioresistant organism. 相似文献
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采用免疫组化技术和PCR-SSCP技术对高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜及大肠腺瘤型息肉的P21、P53蛋白表达和K-ras基因、p53基因突变进行了检测,检测结果高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜和大肠腺瘤型息肉六组P21蛋白表达阳性率分别为57.5％、62.5％、75％、13.3％、6.7％、50％,p53蛋白表达阳性率分别为30％、37.5％、50％、4.4％、22％、33.3％,K-ras基因突变率分别为32.5％、37.5％、62.5％、2.2％、0％、16.7％,p53基因突变率分别为22.5％、25％、37.5％、0％、0％、0％.结果表明大肠腺癌P21、P53蛋白表达比大肠腺瘤增多,但增加不显著(P>0.05), 二组均比癌旁粘膜和正常粘膜P21、P53蛋白表达阳性率高(P<0.01);大肠腺癌K-ras基因和p53基因突变率比大肠腺瘤、癌旁粘膜和正常粘膜组显著增加(P<0.01);高、中、低分化大肠癌各组中,随恶性程度增加,P21、P53蛋白表达增加,K-ras基因和p53基因突变率增加,但均不显著(P>0.05).说明K-ras基因、p53基因突变及其蛋白表达产物P21、P53在细胞癌变、癌细胞恶性表型维持中起重要作用。 相似文献
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文章利用一系列的生物信息学软件分析了盐芥ATPase E Like基因编码蛋白的氨基酸组成、等电点、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质,并同拟南芥ATPase E1、E2、E3蛋白作了对比.结果表明:盐芥ATPase E Like基因编码蛋白分子式为:C1132H1867N325O349S9,属于不稳定蛋白;二级结构主要是以α螺旋为主.在所分析的指标中,盐芥ATPase E Like蛋白与拟南芥ATPase E1、E2、E3相比存在着一定差异. 相似文献
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目的:在大肠杆菌(BL21)中构建可溶性表达的金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)受体拮抗剂。方法:首先确定SEB受体桔抗剂的基因序列,然后用含有SEB受体桔抗剂的基因序列重组质粒表达载体PGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达获得蛋白,产物经GST柱纯化后,利用ELISA检测其与SEB的结合能力并进行其体内外药效学实验。结果:该质粒成功转化为可溶性表达,ELISA结果显示表达产物可与SEB特异性结合。结论:本研究成功对SEB受体拮抗剂GST可溶性表达并对其活性进行初步分析。 相似文献
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IMP3（胰岛素生长因子Ⅱ的mRNA的结合蛋白3）是一个新发现的癌胚胎的RNA结合蛋白,研究发现其参与细胞生长和细胞迁移在胚胎发育的早期阶段．该研究利用实时定量逆转录PCR对IMP3在乳腺癌的诊断和治疗中的应用潜力进行了研究和评估．检测了不同类型乳腺癌样本中IMP3的表达情况,定量PCR结果分析中应用2也小。方法进行了归一化比较．研究结果表明,IMP3基因表达与乳腺癌病人肿瘤的大小及淋巴转移存在明显的相关性（P〈0．01）．不同的临床阶段和病理分期与IMP3的表达水平之间也存在一定的相关性,表明差异不显著（P〉0．05）．该研究表明IMP3作为一种新的肿瘤相关因子,其表达水平与乳腺癌也存在一定的相关性,显示了其作为一种潜在的肿瘤标志物的可能性． 相似文献
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本文研究了黑糯玉米多糖的提取及两种脱蛋白分离工艺的比较.采用热水浸提、醇沉法提取黑糯玉米多糖,用两种改进的方法(氯仿-正丁醇法和三氯乙酸-正丁醇法)脱除蛋白质,以脱蛋白率为指标,通过正交实验L9(34)确定最佳脱蛋白分离工艺后,对比两种方法的最佳组合粗多糖得率及510nm处吸光值的差异.结果表明:三氯乙酸-正丁醇法比氯仿-正丁醇法的脱蛋白效果好,最佳水平脱蛋白率为70.69%,多糖得率仅为67.87%;氯仿-正丁醇法最佳水平脱蛋白率为51.39%,多糖得率为80.31%.本文建立的优化工艺可为黑糯玉米多糖的分离制备提供参考. 相似文献
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Tong-bao LIU Guo-qing CHEN Hang MIN Fuc-heng LIN 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2009,10(6)
Fasciclin family proteins have been identified as cell adhesion molecules in various organisms. In this study, a novel Magnaporthe oryzae fasciclin-like protein encoding gene, named MoFLP1, was isolated from a subtractive suppressive cDNA library and functionally analyzed. Sequence analysis showed that the MoFLP1 gene contains an open reading frame (ORF) of 1050 nucleotides encoding 349 amino acids with a calculated molecular weight of 35.85 kDa and a pl of 7.76. The deduced MoFLP1 protein contains a 17-amino acid secretion signal sequence and an 18-amino acid sequence with the characteristics of a glycosylphosphotidylinositol (GPI) anchor additional signal at its N- and C-terminuses, respectively. Potential N-glycosylation sites and domains involving cell adhesion were also identified in MoFLP1. Sequence analysis and subcellular localization by the expression of MoFLP1-GFP fusion construct in M. oryzae indicated that the MoFLP1 protein is probably localized on the vacuole membrane. Two MoFLP1 null mutants generated by targeted gene disruption exhibited marked reduction ofconidiation, conidiai adhesion, appressorium turgot, and pathogenicity. Our results indicate that fasciclin proteins play important roles in fungal development and pathogenicity in M. oryzae. 相似文献