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1.
目的:筛选大蒜素有效作用于人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP的合适的浓度范围,为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制奠定基础.方法:首先培养人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP,细胞生长至时数生长期后选取0.625～200μg/ml共9个浓度的大蒜素分别作用SKOV-3/DDP细胞株24、48小时后,用MTT法测定细胞活力.结果:0.625～200μg/ml大蒜素均能抑制SKOV-3/DDP细胞的生长,且呈时间--剂量依赖性,但高浓度(100～200μg/ml)时细胞毒性作用明显,作用24小时细胞抑制率分别为75.12%、82.79%,作用48小时细胞几乎全部死亡.结论:以上MTT结果可作为后期药物实验的大蒜素浓度及观察时间筛选的实验依据,可选择中低浓度(0.625～50μg/ml)作为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制(如观察大蒜素对SKOV-3/DDP细胞周期的影响等)的浓度范围. 相似文献
2.
建立了检测1640培养液中顺铂含量的火焰原子吸收光谱实验方法,并用该方法来检测人白血病细胞K562经10μg/mL顺铂孵育8 h后,细胞外液的顺铂含量.具体方法为:将含有顺铂的培养液加热干燥后用含有释放剂的无机酸溶剂溶解,火焰原子吸收光谱法测定铂的含量.对无机酸和释放剂进行了筛选,确定了最佳测定条件并检测了上述实验条件下细胞外液中的顺铂含量.结果显示,含顺铂的培养液或细胞外液加热干燥后,可用体积分数为1%HNO3溶液完全溶解,在溶解过程中加入质量分数为1%的La(NO3)3,可使铂成分获得良好的释放效果.K562细胞经10μg/mL顺铂孵育8 h可致细胞活性显著下降(P0.05),此时约6.2%顺铂进入胞内.与传统顺铂检测方法相比,文中的制样方法可使样品不经灰化即可有效检测肿瘤细胞对顺铂的吸收量. 相似文献
3.
目的:研究凋亡调控相关蛋白来了解顺铂耐药成因,同时考察乙烷硒啉(Ethaselen)在K562耐药细胞中逆转顺铂耐药的作用,并初步探讨其作用机制。创新点:首次研究乙烷硒啉在逆转顺铂耐药中的作用,且此作用与乙烷硒啉诱导细胞凋亡相关。方法:通过长时间脉冲诱导得到顺铂耐药K562细胞,并观察耐药细胞形态及倍增时间。采用MTT法考察乙烷硒啉、顺铂及其联用组在不同细胞株间的生长抑制作用。流式细胞术分析细胞凋亡情况以及细胞内活性氧(ROS)水平。最后,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)考察凋亡调控相关蛋白水平的变化。结论:脉冲诱导得到的K562耐药细胞对顺铂的耐受性是原K562细胞的5.34倍。形态学观察发现,耐药细胞体积增大,粘附性进一步降低。乙烷硒啉与顺铂联用表现出协同效应。当加入少量的乙烷硒啉(顺铂与乙烷硒啉的摩尔比率为10:1),顺铂作用K562耐药细胞的半抑制浓度(IC50)值可以减少21倍。流式细胞术及Western blot表明,乙烷硒啉能够诱导耐药细胞凋亡。其逆转顺铂耐药主要是通过调控Bcl-2及Bax蛋白比例以及通过提高细胞内活性氧水平引起线粒体通透转运孔道(PTP)蛋白孔道的形成来促使释放细胞色素c,进而引起Caspase凋亡途径。 相似文献
4.
目的观察鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株的影响。方法：体外培养人前列腺癌PC-3细胞,加入0μg/ml、2．5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的鞣花酸作用于PC-3细胞,分别作用12小时、24小时和48小时后,应用MTr法测定各浓度组鞣花酸对PC-3细胞的生长抑制作用。应用流式细胞仪检测鞣花酸作用48小时后,PC-3细胞的周期时相变化及凋亡情况。应用免疫细胞化学检测10μg/ml鞣花酸作用24小时后,实验组与对照组细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果：鞣花酸明显抑制PC-3细胞的生长,抑制效应呈时间依赖型和浓度依赖型,与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。应用流式细胞仪检测结果显示,鞣花酸可将PC-3细胞阻滞于G1／S期,并诱导PC-3细胞凋亡。免疫细胞化学结果显示实验组Ctmpase-3蛋白表达明显升高。结论：鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。 相似文献
5.
《实验室研究与探索》2017,(10)
为探索建立适用于从人卵巢癌细胞株SKOV3中提取蛋白质的最优化方法,通过培养人卵巢癌细胞株SKOV3,分别采用Pull-Down Lysis、RIPA裂解法和加有硫脲的细胞裂解液提取细胞总蛋白,使用Bradford法测定蛋白质浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,然后使用微型制备型电泳分离蛋白,根据色谱图上的吸收峰比较从人卵巢癌细胞株SKOV3细胞中提取蛋白质的3种方法。结果表明:不同方法提取人卵巢癌细胞株SKOV3总蛋白的丰度及色谱图存在差异,PullDown Lysis试剂法在分离相对分子质量为15~80 k Da的蛋白质方面具有明显的优势。3种方法中以Pull-Down Lysis试剂法为人卵巢癌细胞株SKOV3蛋白质提取的最优方法,与微型制备型电泳的兼容性更好。 相似文献
6.
目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)体外对S180肉瘤细胞(简称S180)生长有无抑制和诱导细胞凋亡作用。方法:取培养至对数生长期的S180细胞浓度为5×104/mL和1×106/mL分别接种于96孔板和50mL培养瓶中,加入不同浓度的NDV(1∶20、1∶10、1∶5)作用24h,分别用MTT法检测NDV对S180瘤细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:经上述不同浓度的NDV作用24h,对S180细胞生长的抑制率依次为10%、26%、39%,各实验组吸光度值(A490)与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜观察实验组培养的S180瘤细胞,出现细胞核固缩及凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。结论:NDV对体外培养S180细胞增殖有明显抑制作用,可诱导S180细胞凋亡。 相似文献
7.
目的:探讨中药复肝春6号(Fuganchun 6,FGC-6)诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的机理.方法:将FGC-6制成水煎剂,过滤,最后用微孔滤膜过滤除菌.药物浓度以生药计.采用MTT法计算FGC-6对H22细胞的半数致死量浓度和琼脂糖凝胶电泳对药物诱导的凋亡细胞进行DNA ladder分析,流式细胞术检测药物作用下的细胞凋亡率和细胞周期时相变化,透射电镜检测凋亡细胞超微结构的变化.结果:FGC-6对H22细胞的半数致死量浓度为240mg/mL.DNA ladder分析药物组可见明显的凋亡梯状条带.FGC-6作用下的小鼠H22肝癌细胞周期时相发生变化,随药物浓度的增加细胞凋亡率明显上升.透射电镜下FGC-Ⅰ组细胞具有明显的坏死特征.FGC-Ⅱ组肿瘤细胞可见明显的凋亡特征.结论:复肝春6号可以使体外培养的H22细胞染色体DNA断裂,阻滞在细胞周期的G1/G0 期,使H22细胞的超微结构改变等途径诱导细胞凋亡. 相似文献
8.
目的:探讨苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)诱导HT29细胞的凋亡作用及其机制。方法:结肠癌HT29细胞分为空白对照组、奥沙利铂组、苯丁酸钠(1 mmoL/L)+奥沙利铂组、苯丁酸钠(2 mmoL/L)+奥沙利铂组,MTT法测定各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3和核转录因子NK-κB的表达。结果:苯丁酸钠能降低奥沙利铂诱导的HT29细胞存活率,随着其浓度增高,细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),细胞中Caspase-3蛋白和NK-κB蛋白表达则逐渐降低(P<0.05),均呈浓度依赖性。结论:苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3和NK-κB信号传导通路有关。 相似文献
9.
目的:探讨5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞的结构和GSTπ表达的影响。方法:在人胃癌BGC-823细胞株培养液中加入5-氟尿嘧啶,继续培养5h或10h,然后用HE、免疫组化染色和铀-铅染色。光镜、电镜下观察。结果:10h组胃癌细胞外型畸变、细胞器破坏严重;GSTπ灰度发生变化。结论:5-氟尿嘧啶作用10h对人胃癌细胞超微结构及GSTπ基因表达有明显影响。 相似文献
10.
目的:探讨刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的抑制作用。方法:采用MTT法测定了不同浓度的刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果:刺五加注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论:刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。 相似文献
11.
利用扫描电子显微镜,观察家兔气管粘膜上皮游离面的超微结构,并对纤毛和杯形细胞的结构和功能进行探讨. 相似文献
12.
顺铂是目前治疗癌症最有效的药物之一,测定细胞内顺铂的含量对于了解细胞摄取顺铂和顺铂发挥药效有重要作用．本研究通过MTT法检测了顺铂杀伤K562细胞的有效浓度,建立并利用高效液相色谱法（HPLC）检测了K562细胞对顺铂的摄入．结果表明K562细胞经10μg/mL顺铂处理12h后,细胞活性显著下降;细胞外有36．75％顺铂进入胞内．实验数据显示,顺铂对K562细胞的杀伤与其在胞内的累积相关． 相似文献
13.
目的:研究刺五加多糖对体外培养人白血病K562细胞有无增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:取培养至对数生长期的K562细胞(密度为5×104/mL和1×106/mL)分别接种于96孔培养板(100μL/孔)及50mL培养瓶(1.5mL/瓶)中,加入不同浓度的刺五加多糖作用24h后,用CCK-8法检测刺五加多糖对K562细胞增殖抑制作用;荧光显微镜检测细胞凋亡。结果:不同浓度刺五加多糖(0.405、0.810、1.620、2.430、3.240mg/mL)作用K562细胞24 h,抑制率分别为16%、27%、48%、50%、55%;荧光显微镜下观察发现培养K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。结论:刺五加多糖对体外培养K562细胞生长有明显的抑制作用,可诱导K562细胞凋亡。 相似文献
14.
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)对卵巢癌细胞迁移和耐药性的影响及其机制。创新点:本研究发现COX-2对卵巢癌发生发展有一定的促进作用,可以通过上皮间质转化(EMT)途径促进卵巢癌细胞的迁移和顺铂(CDDP)耐药。其抑制剂塞来昔布(CXB)能起到协同抗癌的效果。方法:CCK-8检测CXB和CDDP对SKOV3和ES2细胞的毒性作用。划痕实验评估COX-2对卵巢癌细胞迁移的作用。蛋白质免疫印迹(western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测EMT相关基因和蛋白的表达水平。结论:COX-2可以通过EMT促进卵巢癌细胞迁移和CDDP耐药;CXB可以起到抑制作用,与CDDP协同抗癌。COX-2可以作为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。 相似文献
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目的:研究环氧合酶-2(COX-2)对卵巢癌细胞迁移和耐药性的影响及其机制。创新点:本研究发现COX-2对卵巢癌发生发展有一定的促进作用,可以通过上皮间质转化(EMT)途径促进卵巢癌细胞的迁移和顺铂(CDDP)耐药。其抑制剂塞来昔布(CXB)能起到协同抗癌的效果。方法:CCK-8检测CXB和CDDP对SKOV3和ES2细胞的毒性作用。划痕实验评估COX-2对卵巢癌细胞迁移的作用。蛋白质免疫印迹(western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测EMT相关基因和蛋白的表达水平。结论:COX-2可以通过EMT促进卵巢癌细胞迁移和CDDP耐药;CXB可以起到抑制作用,与CDDP协同抗癌。COX-2可以作为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。 相似文献
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目的探讨银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法将银杏叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,MTT法检测其对HepG2细胞增殖的影响,缺口末端核苷标记（TUNNEL）法检测其对HepG2细胞凋亡的影响。结果银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖效率下降,使凋亡细胞数增加（P〈0．01）,且呈剂量依赖效应。结论银杏叶总黄酮对体外培养的人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的 :研究新城疫病毒在体外抗胃癌细胞活性及其与细胞凋亡的关系。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态、MTT法测NDV在体外对BGC - 82 3的抑制和杀伤作用 ,同时用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡情况及细胞分裂周期各时象的变化。结果 :NDV在体外可使BGC - 82 3胃癌细胞形成明显的细胞病变效应、细胞生长抑制及细胞凋亡 ,且细胞凋亡率与感染时间呈正相关。G2、S期细胞减少 ,增殖指数 (PI)降低 ,与阴性对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :NDV具有显著的抗BGC - 82 3胃癌细胞活性。 相似文献
19.
检测地塞米松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长的影响．对hRPE细胞进行常规培养,取3-4代生长良好的细胞用于实验,采用MTT法研究不同浓度、不同作用时间．地塞米松对hRPE细胞增殖的影响．用免疫细胞化学染色法检测添加不同浓度、不同作用时间地塞米松对hRPE细胞核内细胞增殖核抗原表达的影响．MTT法发现小剂量地塞米松促进hRPE细胞的增殖．50-200mg／L浓度组随着浓度的增高。hRPE细胞的增殖更加明显．大剂量地塞米松抑制hRPE细胞的增殖,且随着浓度的增高,对hRPE细胞的增殖的抑制更加明显．免疫细胞化学染色法发现．在50-200mg／L浓度组,随着浓度的增高,hRPE细胞核内PCNA表达增强。光密度值增大．在400-800mg／L浓度组。随着浓度的增高。hRPE细胞核内PCNA表达减弱．光密度值减少．小剂量地塞米松促进体外培养的hRPE细胞的增殖及细胞核内PCNA的表达,大剂量地塞米松抑制体外培养的hRPE细胞的增殖及细胞核内PCNA的表达． 相似文献