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1.
目的:获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮( AD )的Mycobacterium neoaurum突变株。
  创新点:获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
  方法:(1)诱变方法:采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下:功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。(2)筛选方法:将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚(DCPIP)溶液(0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0),30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液(2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液),室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色(图3)。(3)对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
  结论:获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%(图4),活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显(图5)。薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高(图6和图7),提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8:1,AD的摩尔产率达到60.3%(表1)。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸(atgttctac),导致3个氨基酸(MFY)的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变(g.15a>6t),另一个是有义突变(g.413c>404t),并引起了相应位置上的氨基酸变化(p.138S>135L)。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。  相似文献   

2.
用不同浓度的α-萘乙酸(NAA)200mg/L、400mg/L、600mg/L处理黄瓜种子12小时,以蒸馏水为对照,进行恒温催芽及幼苗培养,观察其对黄瓜种子萌发及幼苗生长的影响,结果表明:NAA处理对黄瓜种子的萌发与幼苗生长有明显的促进作用,发芽率、发芽势、壮苗指数和G值均比对照高,且随着处理浓度的增加各项指标呈现先上升后下降的趋势,其中400mg/L处理对黄瓜种子萌发及幼苗生长的促进作用最明显,为本实验筛选的最佳浓度.  相似文献   

3.
甘草多糖对小鼠细胞免疫的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:观察甘草的有效成分甘草多糖(GlycyrrhizaPolysaccharide)对细胞免疫的调节作用;方法:给胃灌甘草多糖14d,测定二硝基氟苯诱导的小鼠迟发性超敏反应(DTH),用放射免疫法检测血中IL-2、TNF—α含量,观察甘草多糖对小鼠细胞免疫功能的影响;结果:与空白组比较,甘草多糖对DTH反应有-定的增强作用,能升高血中IL-2、TNF-α含量;结论:甘草多糖能明显增强小鼠细胞免疫功能。  相似文献   

4.
目的:研究柴胡疏肝散(chaihu shugan powder,CSGS)乙醇提取物对抑郁模型小鼠行为学的影响。方法:采用慢性不可预见温和应激法(chronic unpredictable mild stress,CUMS)与慢性束缚应激法(chronic restraint stress,CRS)相结合复制小鼠抑郁模型,以柴胡疏肝散水体物为阳性对照,采用体质量增长趋势、蔗糖饮水实验、敞箱实验、情绪性行为评分、悬尾实验、强迫游泳实验来评价柴胡疏肝散醇提物抗抑郁作用。结果:CUMS与CRS相结合可以导致小鼠抑郁:与正常组相比,模型组小鼠体质量增长趋势明显减慢(P〈0.01);在蔗糖饮水实验中,模型组小鼠的蔗糖水偏嗜度下降;在敞箱实验中,模型组小鼠水平运动次数和垂直运动次数均显著性下降(P〈0.01,P〈0.05);在情绪性行为评分实验中,模型组小鼠情绪评分显著性降低(P〈0.05);在悬尾实验中,模型组小鼠的悬尾不动时间显著性升高(P〈0.01);在强迫游泳实验中,模型组小鼠的游泳不动时间显著性升高(P〈0.01)。与模型组相比,柴胡疏肝散水提组和醇提物16.4、8.2、4.1 g·kg-1剂量组均可改善小鼠的抑郁症状(P〈0.05,P〈0.01)且具有剂量相关性。同是8.2 g·kg-1的生药量,与水提物组比较,醇提物组小鼠实验d 28体质量明显高于水提物组(P〈0.05),敞箱实验中水平运动次数明显高于水提物组(P〈0.05),强迫游泳实验中游泳不动时间明显低于水提物组(P〈0.05)。结论:本实验通过CUMS与CRS相结合方法成功复制了小鼠抑郁模型。柴胡疏肝散醇提物对此抑郁模型小鼠具有明显的抗抑郁作用。  相似文献   

5.
目的:探讨大鼠类风湿性关节炎(RA)动物模型的制备、病理组织学观察及血清细胞因子IL-1、TNF-α检测。方法:以实验大鼠为对象,Ⅱ型胶原(CII)和完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant,CFA)混合注射,不同时间点实验组大鼠(O、7、14、28、42d)所获得血样用于做IL-1、TNF-α检测,膝关节标本进行组织病理学研究。结果:模型组血清IL-1、TNF-α在急性期增高明显,与对照组差异有统计学意义(P〈0.05)。模型组关节组织标本观察到滑膜组织增生,其局部骨吸收破坏明显,软骨表层胶原纤维溶解、软骨细胞变性坏死,软骨表面凹凸不平。结论:采用异种CII与CFA制备的RA模型,可以用于RA组织病理学、发病机理及治疗方面的研究。  相似文献   

6.
目的研究氟伐他汀对不稳定型心绞痛患者血清白介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的影响。方法选择2006年9月至2007年7月79例不稳定型心绞痛患者,入院后随机分为2组:氟伐他汀干预组42例:常规药物治疗基础上加用氟伐他汀40mg/d;对照组37例:常规药物治疗。分别于药物治疗前、药物治疗后2周采集静脉血,测定血清IL-18和TNFα的浓度。结果药物治疗后,对照组(P〈0.05)及氟伐他汀干预组(P〈0.01)血清IL-18和TNF&浓度均明显降低;氟伐他汀干预组血清IL-18(P〈0.01)和TNFα(P〈0.01)浓度明显低于同期对照组。结论氟伐他汀可明显降低不稳定型心绞痛患者血清IL-18和TNFα浓度。  相似文献   

7.
目的:研究低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平在SD大鼠脑梗死急性期不同时间点的动态变化;探讨两个因子之间的变化是否具有相关性;为脑梗死的治疗和相关的药物研制提供新的靶点。方法:将雌雄各半的36只SD大鼠(月龄2-3月,体重250-320g)随机分为三个组,手术组(简称甲组,16只)、假手术组(简称乙组,16只)、空白组(4只)。甲、乙两组又分为ABCD四个小组。每个小组有4只大鼠,雌雄鼠各两只。参照改良线栓法闭塞右侧大脑中动脉,制作大鼠局灶性脑梗死模型。取血后用ELISA法测定血液中HIF-1α与VEGF的浓度;通过方差分析统计HIF-1α与VEGF两个因子在手术组、假手术组、空白组不同时间点的变化特点;通过线性相关分析的统计方法分析HIF-1α与VEGF因子之间表达的相关性。结果:(1)HIF-1α因子的表达在1/2h出现上调,2h、3h、6h持续少量增高,12h达到高峰。随后表达有所下降,但在168h(7d)时表达又有所增高。(2)VEGF因子的表达也在1/2h出现上调,2h、3h、6h、12h持续少量增高,并在24h达到高峰。随后表达有所下降,在168h(7d)时表达又有所增加。(3)HIF-1α因子和VEGF因子的表达在12小时内表现明显的相关性。结论:(1)HIF-1α自1/2h开始变化,在脑梗死超早期就开始出现表达增加,12h达高峰,对脑梗死后一系列缺氧反应起到重要作用;(2)VEGF自1/2h开始变化,24h达高峰,也参与了脑梗死后的应急表达;(3)HIF-1α因子和VEGF因子在12h内的表达具有明显的相关性。  相似文献   

8.
目的探讨FolFox4与XElox方案一线治疗晚期大肠癌的临床疗效及不良反应。方法将晚期大肠癌患者64例随机分为两组:FolFox4组采用L—OHP85mg/m2,CF200mg/m2,5-FU1000mg/m2,2周重复1次,28d为一周期;XElox组采用L—OHP130mg/m2、每2周1次,Xeloda1800mg/(m2·d),21d为一周期。两组都化疗164周期,记录疗效与治疗期间毒副反应。结果FolFox4组总有效率56.3%(18/32),中位缓解期7.5月,中位生存期11月;Xelox组总有效率46.9%(15/32),中位缓解期、中位生存期分别为7.0月、9.5月。两组在客观疗效以及中位缓解期、中位生存期方面均无显著性差异。结论FolFox4与XElox方案一线疗效晚期大肠癌客观疗效中位缓解期及中位生存期比较无显著性差异,两组毒副反应均较轻,作为一线治疗晚期大肠癌两方案均可作为首选方案,  相似文献   

9.
目的:研究大黄素对脑缺血-再灌注小鼠探索认知功能的改善作用及其机制。方法:采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑缺血-再灌注损伤模型,进行探索实验和跳台实验,观察腹腔注射大黄素10.0、1.0、0.1 mg·kg-1对脑缺血-再灌注小鼠探索认知功能的改善作用,并对各剂量组小鼠脑组织和血液中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活力、脑组织中过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)含量和过氧化氢酶(catalase,CAT)活力进行测定,并测定脑指数。结果:大黄素可改善脑缺血-再灌注损伤所致的探索认知功能障碍;减少NO和H2O2含量,降低NOS活力,提高CAT活力和增加脑指数。结论:大黄素对脑缺血-再灌注损伤小鼠探索认知功能有改善作用,其作用机制可能是通过降低NOS活力和增强CAT活力,提高脑组织对氧自由基的清除能力,从而减轻缺血-再灌注引起的脑组织损伤。  相似文献   

10.
目的:探讨前期研究筛选出的丹参七种水溶性有效成分最优配伍组合样品A2、B4、C11对脑缺血再灌注(ischemia reperfusion)小鼠学习记忆的保护作用。方法:采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型,应用水迷宫实验,观察配伍组合样品对脑缺血再灌注小鼠记忆功能的保护作用,检测小鼠断头耐缺氧存活时间,脑组织中超氧化物歧化酶(superoxi dedismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、乙酰胆碱酯酶(aeetyleholine esterase,ACHE)活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。免疫组织化学方法检测小鼠海马神经元凋亡相关天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-asparate protease-3,caspase-3)和神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达。结果:丹参7种水溶性有效成分配伍组合样品B4、C1l可明显改善小鼠脑缺血再灌注所致的记忆障碍,增强耐缺氧能力,提高脑内SOD,CAT活性,降低AChE活性和MDA含量;抑制凋亡蛋白caspase.3表达,上调NGF表达。其中以B4(2.8μm01·L-1)、C11(30.0iμmol·L-1)组作用最为明显(P〈0.01),A2各个剂量组效果不显著(P〉0.05)。结论:丹参7种水溶性有效成分配伍组合样品B4、C11对脑缺血再灌注损伤小鼠记忆功能有保护作用,其机制可能通过提高清除脑内自由基能力,抑制小鼠神经细胞凋亡,促进神经再生,来减轻脑缺血再灌注引起的脑组织损伤。  相似文献   

11.
以乙二胺、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯和二乙醇胺或三羟甲基氨基甲烷为原料,合成了水溶性树枝状聚(胺-酯).讨论了树枝状聚(胺-酯)用量、离心时间及溶液pH值对于Cr3+去除率的影响.实验结果表明,25℃时,当pH=9.22,以3000 r/min的转速离心13 min,用20 mL PAE(NH2)8(c=0.01 mol/L)溶液处理10 mL CrCl3(c=0.1 mol/L)溶液时,Cr3+的去除率最高,为81.72%;25℃时,当pH=8.48,以3000 r/min的转速离心10 min,用20 mL PAE(OH)16(c=0.01 mol/L)溶液处理10 mL CrCl3(c=0.1 mol/L)溶液时,Cr3+的去除率最高,为90.85%;25℃时,当pH=7.67,以3000 r/min的转速离心7 min,用20 mL PAE(OH)24(c=0.01 mol/L)溶液处理10 mL CrCl3(c=0.1 mol/L)溶液时,Cr3+的去除率最高,为95.17%.  相似文献   

12.
We hypothesized whether systemic administration of high-molecular-weight hyaluronic acid (HMW HA) could rescue trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)-induced colitis through Toll-like receptor 4 (TLR4) signal. C3H/HeN mice and C3H/HeJ mice were used. Mice were divided into four groups: control, 50% ethanol treatment group, TNBS treatment group, and TNBS plus HA treatment group. The weight changes, clinical scores, macroscopic scores, and histological scores were recorded. Cyclooxygenase 2 (Cox-2) and prostaglandin E2 (PGE2) expressions were measured both in colons and peritoneal macrophages from these mice. HA was a rescue therapy for the colitis induced by TNBS only in C3H/HeN mice. The clinical score, macroscopic score, and histological score were much lower in C3H/HeN mice receiving TNBS plus HA treatment. Cox-2 and PGE2 expressions only increased in C3H/HeN mice. These Cox-2 expressing cells were macrophages. HA can also promote the production of Cox-2 and PGE2 in peritoneal macrophages from C3H/HeN mice. Our data demonstrated that HMW HA can rescue TNBS-induced colitis through inducing Cox-2 and PGE2 expressions in a TLR4-dependent way. Macrophages may be the effector cells of HMW HA.  相似文献   

13.
甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿风湿关节炎   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的评价甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿关节炎(RA)临床疗效以及安全性.方法随机将90例类风湿关节炎患者分为2组:联合治疗组45例,口服甲氨蝶呤10~15 mg 1次/周,益赛普50 mg 1次/周,皮下注射;对照组45例单用甲氨蝶呤10~15mg 1次/周.疗程为3月,对2组的临床症状及实验室指标改善情况进行评价.结果2组的临床症状即关节疼痛数、关节肿胀数的改善均有良好效果,联合治疗组优于对照组;2组治疗后血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)均明显降低,且联合治疗组优于对照组.安全性方面,联合用药组一例出现肺部感染,停药及给予消炎药后好转.1例最初出现注射局部皮肤红肿伴瘙痒,3d后自行消失,未影响患者正常用药.对照组1例于服用甲氨蝶呤第2日出现头晕及胃肠道不适,1例出现口腔溃疡,1例化验血常规白细胞降低.结论甲氨蝶呤联合益赛普治疗类风湿关节炎疗效肯定,不良反应少,且明显较单用甲氨蝶呤组效果好.  相似文献   

14.
目的:制备BSA壳聚糖一海藻酸钠肠溶微囊并测试释放特性。方法:以微球的包封率为制备工艺优化指标,利用复凝聚法,通过正交实验筛选微球的最佳制备工艺奈件制备微球。结果:最优条件为牛血清白蛋白和海藻酸钠的比例为1:6,壳聚糖的浓度为0.1%(g/m1),氯化钙的浓度为1%(g/m1)以及搅拌时间为1h。结论:BSA微囊在小肠中对蛋白有一定的缓释效果.交释效应不明显。  相似文献   

15.
以Cu(OAc)2-NH4NO3为氧化剂氧化糠偶姻,通过考察反应时间、反应温度、氧化剂用量和冰醋酸用量对糠偶酰合成的影响,获得了最佳的合成条件为:n(Cu2+)∶n(NH4NO3)∶n(糠偶姻)=1∶40∶32,反应温度90~95℃,回流时间90 min,获得产物的产率达87.6%.固定冰醋酸的用量为12.5 mL,将反应物的投料量增大至原来的4.00倍,对产物的产率、颜色和熔点的影响很小.  相似文献   

16.
采用NaBH4/CaC12的还原体系将乙酰基二茂铁还原为1-二茂铁基乙醇。探讨NaBH4、CaC12的用量及反应时间对还原产物收率的影响,得到将乙酰基二茂铁还原的较为理想条件:甲醇为溶剂,投料按FcCOCH3:NaBH4:CaC12=1:3:2,碱性条件下回流1.5 h,1-二茂铁基乙醇的收率达87.5%。  相似文献   

17.
以1mg/ml的柑橘和瓯柑橘皮类黄酮溶液、1%的柑橘皮和瓯柑橘皮水、乙醇提取液各0.1mL加入离体蛙心灌流液,结果使蛙心收缩力分别提高101.3±49.6(%),94.0±25.2(%),81.4±38.5(%),93.9±34.0(%),150.3±117.8(%),165.1±113.5(%);心率分别降低19.8±31.9(%),22.1±22.3(%),28.0±16.2(%),28.5±20.8(%),19.3±14.2(%),23.0±24.3(%)(均P〈0.05)。说明柑橘和瓯柑橘类黄酮、柑橘皮和瓯柑橘皮的水、醇提取液对离体蛙心均有增强心肌收缩力和减慢心率作用,各药物的持续时间在2~12min之间。  相似文献   

18.
目的:探讨复方丹参片早期干预对APP/PS1转基因小鼠学习记忆的影响及作用机制。方法:4月龄野生型小鼠和APP/PS1转基因小鼠分别灌胃给予溶剂或药物8周后,采用新物体识别实验和跳台实验评价复方丹参片对小鼠行为学表现的影响;应用ELISA检测小鼠海马β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)Aβ40、Aβ42的含量;采用Real time PCR和Western blot分别检测胰岛素分解酶(insulin degrading enzyme,IDE)/脑啡肽酶(neprilysin,NEP)m RNA和蛋白水平的变化。结果:新物体识别实验结果显示,复方丹参片720 mg·kg-1显著性增加APP/PS1转基因小鼠对新物体的识别指数。跳台实验结果显示,复方丹参片720、360 mg·kg-1显著性减少APP/PS1转基因小鼠学习次数,此外,复方丹参片720 mg·kg-1明显增加小鼠在平台的停留时间。ELISA结果显示,复方丹参片720、360 mg·kg-1显著性降低APP/PS1转基因小鼠海马Aβ40、Aβ42水平。Real-time PCR结果显示,复方丹参片720 mg·kg-1显著性上调APP/PS1转基因小鼠海马IDE和NEP m RNA的表达。Western blot结果显示,复方丹参片720 mg·kg-1显著性增加小鼠海马IDE蛋白表达。结论:复方丹参片可改善APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力,可能与减少海马Aβ水平和增加IDE的表达有关。  相似文献   

19.
目的:建立稳定而特异性强的小鼠社交恐惧行为模型。方法:采用针对社交接触行为给予条件性足底电击(O.7mA,1S,1~5次)的方式建立小鼠社交恐惧模型。分别于电击后d2和d15检测小鼠的社交探究行为,以探究时间百分比(investigationtime%,1T%)为社交恐惧行为评价指标。分别采用小鼠高架十宁迷宫实验、明暗穿箱实验和强迫性游泳实验评价小鼠的广泛性焦虑行为和抑郁样行为。结果:在条件性电击后d2和d15的社交探究实验中,与非丰十交刺激(non.socialstimulus,NSS)组比较,条件性社交刺激(conditionedsocialstimulus,CSS)组小鼠IT%均显著减少。在小鼠高架十字迷宫实验、明暗穿箱实验和强迫性游泳实验上,CSS组与NSS组各行为指标差异均无显著意义。结论:采用条件性足底电击方式可成功建立小鼠社交恐惧行为模型,模型症状可持续至少2周,且不伴随广泛性焦虑行为或抑郁样行为,具有良好的稳定性和特异性。  相似文献   

20.
目的:研究三七总皂苷对小鼠学习记忆功能及对内乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。方法:对东莨菪碱致学习记忆障碍小鼠进行跳台及“Y”型迷宫行为学检验,同时测定了小鼠脑内AchE的活性。结果:在跳台实验和“Y”型电迷宫行为学检测中,三七总皂苷用药组(100,200mg/kg)对小鼠学习记忆功能有明显的改善作用,并可抑制小鼠脑内AchE活性。结论:三七总皂苷对东莨菪碱造成的学习记忆获得障碍小鼠的学习记忆能力均有明显的改善作用,该作用可能与抑制AchE活性有关。  相似文献   

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