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采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值. 相似文献
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hCLP46是从MDS-AML的CD34＋细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因，为了进一步对该基因进行功能、性质研究，本实验利用RT-PCR技术对该基因进行了组织特异性表达检测，并将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，转染U937细胞，发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-对p15基因的上调。此外，利用生物信息学手段对该基因进行序列分析，得到其启动子区存在一个典型的“CpG island”。提示该基因有可能参与甲基化调节途径。通过本文的研究，为进一步研究该基因的作用机制打下基础。 相似文献
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铜是生物体必需的微量元素，目前发现，体内铜平衡机制是蛋白质介导的，它将细胞内的铜传递给靶蛋白。这一途径是通过新的蛋白质家族——铜伴侣蛋白实现的．铜伴侣蛋白对细胞内铜途径有重要作用。介绍了金属伴侣蛋白的功能、结构特点及铜伴侣蛋白的作用。 相似文献
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《中国科学基金》2016,(6)
<正>北京大学化学与分子工程学院陈鹏课题组利用新开发的"比较蛋白质组学"技术,揭示了大肠杆菌抵抗酸刺激的新机制。相关研究成果近期以"Comparative proteomics reveal distinct chaperone-client interactions in supporting bacterial acid resistance(比较蛋白质组学技术揭示细菌抗酸伴侣蛋白的独特底物)"为题在《美国科学院院刊》发表(论文链接:http://www.pnas.org/content/early/2016/09/09/1606360113)。 相似文献
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利用泽当地区气象站建站以来(1960~2005年)46年的蒸发量资料,对蒸发量的年、季、月变化趋势、年代季变化特征、突变等气候变化作了较全面的分析。结果表明:46年来泽当地区的各季、月蒸发量呈现不同的下降趋势,年蒸发量以-9.36mm/10a的倾向率减少,偏少趋势主要表现在春、夏两季,其中5月份蒸发量偏少趋势最明显,倾向率为-2.5mm/10a。年蒸发量在1964~1976年、2002~2005年为相对偏少期;1981~2001年为蒸发量相对偏多期。采用Mann-Kendall方法对年、季进行气候突变检验表明,年蒸发量在2000年发生1次气候突变,春、夏、秋季蒸发量分别发生2次气候突变,而冬季蒸发量发生了4次气候突变。 相似文献
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公益性技术的发展对创新型国家的建设具有重大意义,属于政府财政职能范畴.在政府科技财政实践中,关键难点就是如何构建一个科学、实用的公益性技术筛选模型.利用以往有关定性研究成果,构建了公益性技术筛选模型--筛选指标体系、定量评价方法、福利效用指数,然后将筛选模型和专家库技术有效结合起来,通过同行评议渠道收集评价数据,最终达到从海量的技术成果中筛选出满足经济社会公共需求的公益性技术的目的. 相似文献
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溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析 总被引：1，自引：0，他引：1
铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。 相似文献
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Nidhi Gupta Ramesh Kandimalla Kumari Priyanka Gagandip Singh Kiran Dip Gill Surjit Singh 《Indian journal of clinical biochemistry : IJCB》2014,29(1):69-73
Dietary and lifestyle factors have been shown to have a profound effect on paraoxonase-1 (PON1) activity. Cigarette smoke has been shown to inhibit its mass and activity where as resveratrol has been shown to enhance it. We exposed hepatoma derived cell line (HepG2) to resveratrol and nicotine in varying doses and measured PON1 enzymatic activity and PON1 gene expression. In addition, total protein content of HepG2 cells was also measured. Resveratrol in a dose of 15 μmol/l or above significantly increased the PON1 enzyme activity (p > 0.001) where as nicotine in a dose of 1 μmol/l or higher significantly reduced it (p < 0.05). The resveratrol in this dose also enhanced the PON1 gene expression whereas nicotine decreased it as compared to controls. However, the protein conent of cells was not changed suggesting that they were not cytotoxic in the doses used. Till date the antioxidant vitamins have shown disappointing results against LDL oxidation and cardiovascular protection. However, the effect of resveratrol on PON1 gene expression and activity was significant, suggesting increase in PON1 activity and enhanced gene expression may be its alternative mechanism for offering protection against cardiovascular disease and may be an potential pharmacological agent which can be used for this. 相似文献
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Identification and characterization of polyubiquitin gene from cDNA library of aspergillus fumigatus
Jata Shankar Taruna Madan Seemi Farhat Basir P. Usha Sarma 《Indian journal of clinical biochemistry : IJCB》2005,20(1):208-212
Aspergillus fumigatus (Afu) causes allergic and invasive forms of diseases in humans. In order to identify genes relevant
for pathogenesis, a total of 235 cDNA clones were randomly selected and sequenced from cDNA library of Afu. One of the partially
sequenced cDNA clones was homologous to polyubiquitin. Sequencing of the complete cDNA clone showed an open reading frame
of 912 bases. Comparison with genomic sequence of Afu using BlastN program, revealed that polyubiquitin gene comprises of
992 bases and contains one intron of 80 bases. The recombinant expression of fusion protein showed an approximately molecular
weight of 43-kDa on SDS-PAGE. The translation product of the cDNA sequence showed four tandem repeats of 76 amino acid residues
in a single polyubiquitin protein and showed 100% identity with polyubiquitin protein sequences of S. cerevisiae, N. crassa,
C. albicans, S. pombe, and M. grisae. Polyubiquitin gene is known to play important role in a variety of cellular processes
and recently have been implicated in fungal pathogenesis. Identification of polyubiquitin gene of Afu has opened up scope
to study its role in understanding Aspergillus biology and pathogenesis. 相似文献
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植物转基因技术为培育高效抗虫水稻新品种开辟了新的途径。豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因是一种广谱抗虫基因 ,该成果采用最新研究策略 ,对该基因进行体外修饰 ,使其转译产物最终定位于细胞的内质网中 ,以增加外源抗虫物质的稳定性。实验证明 ,转修饰cpti基因的植物无论是抗虫蛋白含量还是抗虫能力均比转野生型cpti基因植物有显著的提高。已获大量转基因水稻株系 ,包括著名水稻恢复系明恢 81和明恢 86,并用其配制了杂交组合。转基因抗虫杂交水稻已获国家有关部门批准进行中间试验和环境释放 ,大田试验结果表明 ,转基因杂交水稻具有优良的抗虫特性和广阔的应用前景。 相似文献
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为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律，根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物，经PCR扩增，从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明，该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus，SeMNPV）pif-2的同源物，读码框含1278bp，编码425个氨基酸的蛋白质，推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明，SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋），经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达，SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带，经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。 相似文献
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Dengue fever is one of the major health problems in India. Interaction with specific receptor(s) at the cell surface is one
of the first events in the pathogenesis of Dengue virus. However, relatively little is known about these receptors. Cellular
receptors in human monocytes and mouse neural cells are main target for the viral infection. The envelope protein of the virus
(E-protein) plays important role in attachment of virus to target cells and their interaction with cellular receptors. The
modulation of receptor gene(s) and/or protein(s) can be used as a method for interfering with virus entry and can thus become
a new method for disease prevention. The receptors can be purified by affinity chromatography using E-protein as ligand. It
has been reported that addition of highly sulfated heparan sulfate prevents E-protein binding to target cells suggesting that
heparan sulfate is utilized by dengue envelope protein to bind to target cells. 相似文献
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根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物，应用RT-PCR技术，从脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession，AY628648）。扩增片段全长591bp，共编码197个氨基酸的前体蛋白，其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失，分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达，获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达，并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。 相似文献