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1993年凯利·穆利斯因为发明PCR技术而荣登诺贝尔颁奖台。什么是PCR?它是指“DNA聚合酶链式反应”(polymerase chain reaction, PCR), 其原理是:在存在DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液的反应混合物中,在热稳定DNA聚合酶的催化下,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片段进行扩增。说得简单些,就是一种DNA分子的特异扩增技术,即将微量的特异DNA分子进行成倍扩增。PCR技术最大的优点在于它能 相似文献
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利用多重PCR建立转基因棉花中棉41外源基因的检测体系.多重PCR技术的关键在于多重PCR反应条件的优化,本文从多重引物组合、PCR反应体系、PCR反应条件这三个方面对转基因棉花多重PCR反应进行优化,建立了扩增效率较高的中棉41的六重PCR反应体系,优化后的体系为HotstarTaq DNA聚合酶用量为1.25 U/50 μL,镁离子的终浓度为3.5 mM,dNTP的终浓度为400 μM,BSA(10mg/mL)的加入量为2μL,选取58℃为反应扩增的退火温度.利用优化的多重PCR体系特异性地检测到转基因棉花中棉41中的外源基因启动子CaMV 35S、终止子TNOS、报告基因NPTII和抗虫基因CrylAc. 相似文献
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影响食品安全的食源性致病菌快速检测技术研究进展 总被引：3，自引：0，他引：3
食源性致病菌是影响食品安全的主要因素之一。传统的以培养为基础的检测方法操作复杂、特异性不强、所需时间长,而近年来发展起来的免疫学方法及分子生物学方法广泛应用于食源性致病菌的检测,克服了传统检测方法的不足。目前常用的免疫学方法主要包括ELISA、免疫磁性分离技术和免疫胶体金技术等;分子生物学方法则主要有依赖PCR的DNA指纹图谱技术、多重PCR、基因芯片、定量PCR和NASBA等技术。 相似文献
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本实验分别采用酚———氯仿抽提法、快速抽提法、胍盐酸提取法和天为时代试剂盒法对蒙古马血样进行基因组DNA的提取,再利用琼脂糖凝胶电泳技术、紫外分光光度计和PCR扩增技术,对提取得到的DNA纯度、浓度及实用性进行检测,从而选择一种高效、快速、经济的从蒙古马血液中提取基因组DNA的方法。 相似文献
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目的:建立简便、快捷、稳定可靠的鉴定小鼠基因型方法,维护动物伦理福利。方法:基因敲除小鼠后代鉴定时,分别从鼠尾,鼠耳,趾甲三个部位提取DNA,通过优化DNA提取技术,经分光光度计检测,PCR扩增等技术,比较分析DNA纯度、提取时间,及基因型鉴定结果。结果:取组织提取DNA,经分光光度计检测,发现DNA浓度尾尖最高,耳尖次之,趾甲浓度最低,但是纯度最好。经PCR扩增技术发现不同基因型的不同部位提取DNA鉴定结果一致。结论:剪趾甲提取DNA操作方法相对于其他常规方法,操作简单,耗时最短,基因型鉴定结果可靠,对小鼠本身伤害更小,可用于规模化的小鼠基因型鉴定实验中。 相似文献
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本试验通过培养转大豆WRKY基因烟草的T1代种子,获得T1代植株.经过卡那霉素的筛选,获得具有抗性的植株,利用CTAB法提取叶片DNA,然后通过聚合酶链式反应(PCR)技术检测外源基因在T1代中的遗传稳定性. 相似文献
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幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论 成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础. 相似文献
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《科技通报》2017,(2)
DNA条形码技术是一种新型的生物身份识别系统,能够利用鉴别物种内的一段标准的、具有足够变异性、并相对较短且易扩增的DNA片段对生物物种实现快速的自动鉴定。本研究首先采用试剂盒提取法从17个贝母种79个样品中提取了基因组DNA,并进行了纯度与浓度鉴定;然后采用ITS1、ITS2序列引物进行PCR扩增和产物测序,最后进行序列比对,以明确DNA条形码序列ITS1和ITS2在浙贝母种质资源中的鉴定效果。结果发现,浙贝母地方种间的ITS序列差异不大,ITS序列对浙贝母种内分辨率过于低下。由此表明DNA条形码ITS1、ITS2序列并不太适合用作浙贝母的DNA条形码技术。 相似文献
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尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG)是防止PCR假阳性反应的工具酶,参照限制性DNA内切酶活力测定法的原理(以完全消化DNA带型的最高稀释度为一个活性单位)和应用凝胶成像分析技术,建立了UNG酶活性的非同位素检测新方法.反应体积为20μL,底物dU ung(dU DNA)为165μg,加UNG后在适当温度下反应10min,使底物去除尿嘧啶,其AP位点经碱降解.通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析,测定底物dU ung的残留量以测定UNG酶活性.酶活力以37℃每分钟降解1ngdU ung的酶量为一个单位,检测灵敏度为1ng,检测线性范围为0～165ng.该法简便易行、客观、精密,重复性好(CV<3%),结果显示直观. 相似文献
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大黄鱼基因组DNA的提取及其RAPD分析条件的探索 总被引：9，自引：0，他引：9
通过实验筛选出一种快速、简便提取大黄鱼基因组 DNA的方法 .以该法提取的大黄鱼基因组 DNA为模板 ,对大黄鱼 RAPD分析中的 DNA模板浓度、镁离子浓度、d NTPs浓度、引物浓度和 Taq酶浓度进行了研究 ,初步确定了适于大黄鱼 RAPD分析的最佳反应体系 :2 5μL反应体系中 ,含模板 DNA2 5 ng,1 0× PCR缓冲液 2 .5μL,d NTPs1 0 0μmol/L,Mg Cl2 2 .5 mmol/L,引物 0 .2μmol/L,Taq DNA聚合酶 1 .0 μmol/min. 相似文献
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对PCR技术进行简要介绍,主要从以下几个方面进行了介绍:PCR的概念和要素,PCR技术在我国国内农业中的应用.主要从农业方面来讨论PCR技术的应用,而这些应用并不是一种前景性的,而是已经应用于农业中,相当于是时PCR技术在农业中应用的一个总结. 相似文献
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分子生物学技术作为生命科学中发展最为迅速的学科之一，其对致病菌检测产生的影响越来越深远。目前，食源性致病菌的检测正从传统的培养方法向分子水平方法改进。我们主要介绍了多重PCR，DNA指纹图谱技术，核酸探针技术和基因芯片技术在食源性致病菌检测方面的最新研究进展。 相似文献
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PCR技术快速鉴别牛、羊、猪皮革的初步探讨 总被引：1，自引：0，他引：1
提取牛、羊、猪3种动物皮革组织中的DNA,设计了3对特异性引物,PCR扩增,初步建立了这4种动物皮革成分的鉴定方法。DNA的提取的质量及其后的PCR鉴定依赖于皮革的加工程度,如何从皮革成品中提取有效的核酸信息需进一步研究。 相似文献
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本研究根据马、驴线粒体DNA中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源性成分的DNA片段,再经限制性内切酶Sau 3A和Alu Ⅰ的酶切鉴定可以区分马源性成分和驴源性成分,PCR扩增产物的测序结果验证了酶切鉴定结果的正确性.引物灵敏度测试结果表明该方法的检测低限均达0.3%,该对引物可以成为检测马、驴源性成分高效准确的检测工具. 相似文献
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人类基因组计划的意义在于人类从分子水平认识自我,是治疗重大遗传或恶性疾病的基础性工作。诺贝尔化学奖获得者F. Sanger的DNA测序法（1980年）和K. B. Mullis的PCR技术（1993年）是人类基因组计划实施的基础。Sanger关于基因测序的文章被引用6.3万余次,Mullis的PCR文章被引用1.4万余次,足见其广泛的影响。纵观科学历史进程,技术方法类的突破能促进科技的跨越发展。中国应选择重大战略性领域,大力争取和培养人才,给予充足财力支持,坚持探索新技术和新方法,推动科技跨越发展。 相似文献
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王玮 《科技成果管理与研究》2021,16(12):8-9
由于DNA分子高存储密度、易于复制等出色的理化特性,用DNA分子存储数据引起了人们的极大关注.DNA中信息的读取可通过使用先进的技术测序(如Illumina)后解码(如使用ASCII码和二进制系统)来完成.从理论上讲,DNA能够实现极高密度的数据存储,如100 g单链DNA(ssDNA)即可存储世界上的所有数据(40 ZB).但是,DNA信息存储技术信息在多个角度受到了质疑和挑战.例如,现有方法大多将DNA序列作为二进制代码,这降低了信息存储密度;使用短DNA很难在测序后按顺序缝合,而长链DNA成本高且易断裂,测序和数据分析都需要特殊的仪器或技术.因此,要构建一个具有实际应用价值的DNA存储系统,这些问题必须得到解决. 相似文献