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《科学中国人》2015,(26)
目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。 相似文献
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人IFNγ／TNFβ杂交蛋白的初步纯化及其抗癌效应研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用国产的微孔玻璃珠吸附层析法分离纯化人干扰素γ／肿瘤坏死因子β重组杂交蛋白，它具有抗病毒和抗肿瘤的双重功能活性，其抗病毒活性为１．７×１０￣６ｕ／ｍｇ蛋白，细胞毒活性为１．４×１０￣６ｕ／ｍｇ蛋白。该杂交蛋白在体外对人宫颈癌细胞株（ＭＥ１８０），人胃癌细胞株（７９０１）和人肺癌细胞株（Ｇ６）均有明显的杀伤作用，并都显著地高于单一的ＩＦＮγ或ＴＮＦβ对这些肿瘤细胞的杀伤。本文还对γＴＮＦβ的抑瘤机理进行了初步探讨。 相似文献
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本试验用VP1基因C末端与表达载体连接,转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达,收集不同时间段的菌液进行SDS-PAGE,结果表明重组的VP1基因C末端蛋白在大肠杆菌中能高效表达,表达的目的蛋白分子量约为16kd,而且重组菌诱导裂解物可在16kd处看到一条特异的蛋白条带,与预期大小一致,阴性对照未出现表达条带,而且重组菌在IPTG终浓度为1mmoL/L诱导6 h时表达量最大。表达产物主要以包涵体的形式存在,提取和裂解包涵体后,进一步纯化表达的目的蛋白,可获得纯度达70%以上的目的蛋白。 相似文献
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重组人干扰素是一类具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等生物活性的细胞因子。本文从专利申请的角度对重组人干扰素的宿主表达、突变体、化学修饰、融合蛋白等研究进展进行了回顾。 相似文献
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赵凡 《科技成果管理与研究》2014,(11):10-11
药物长效化在临床上有着十分重要的地位和极大的作用。长效重组蛋白药物是世界上药物研发的新热点,也是现有药物的升级换代产品,是深化研究的必然发展趋势,具有极好的社会效益和极为突出的经济效益。在国家863计划项目“白蛋白修饰新药研发”、国家中小企业创新基金“国家I类新药长效干扰素a2b融合蛋白临床前研究”、国家重大新药创制专项“长效重组融合蛋白国家I类新药临床前研究”等课题的支持下,天津林达生物科技有限公司董事长富岩研究员主持开发的长效“注射用重组人血清白蛋白／干扰素α2a融合蛋白”新药相比较现有常规重组干扰素药物具有更长的血液半衰期、更好的安全性和更明显的临床治疗优势,是更有效和低成本的长效化病毒性肝炎患者和癌症患者药物的临床治疗用新药,是现有重组干扰素α类药物的升级换代产品。 相似文献
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网络学科导航的信息重组 总被引：2，自引：0，他引：2
网络学科导航是因特网上用于重组与开发网络学科信息资源的一种有效工具。文章针对网络学科导航的信息重组问题．主要对网络学科导航的信息、重组组织方式和重组过程进行了分析,并对网络学科导航信息重组应注意的几个原则问题进行了探讨。 相似文献
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厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。 相似文献
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《科学中国人》2015,(26)
目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。 相似文献
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His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化 总被引：1，自引：1，他引：1
将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。 相似文献
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信息重组——谈学科信息导航 总被引：5，自引：2，他引：5
信息重组是信息研究的一个新方向，也是知识创新的一个途径。本文阐述了信息重组的重要性，必要性，可能性，以及应用信息重组开展学科信息导航。 相似文献